两步法融合pcr

郁亨学1907实时荧光定量pcr两步法与三步法的异同是什么?如何选择使用?比如引物退火是54度,选择三步法还是2步法? -
伊炎凯18261541952 ______ 异同?我觉得还是看你用的机器和试剂盒吧,主要是那个聚合酶的要求.有的推荐两步法,有的推荐三步法. 比如,ABI,roche都推荐两步法,tiangen的推荐三步法. 我觉得,如果引物设计时的Tm值如果接近60度(比如用ABI的primer express设计的引物),就直接用两步法;如果Tm值不太符合两步法要求,即60度,还是三步法好些!

郁亨学1907实时荧光定量PCR,是一步法好还是两步法好? -
伊炎凯18261541952 ______ 一步法从方便性上来说肯定是更方便的,但是有时候一步法往往达不到两步法那么好的效果,所以具体还是看你的需求.

郁亨学1907两步法RT - PCR时候,没有目的条带,或者条带不是我想要的,有可能是什么原因? -
伊炎凯18261541952 ______ 第一,引物设计不当,blast验证引物或者重新设计引物 第二,扩增条件不对,可以适当调低退火温度和增加延伸时间 第三,PCR试剂或者RNA/cDNA模板有问题,拿个内参验证看看,像什么GAPDH,b-actin之类的基因.拿cDNA跑个电泳看看

郁亨学1907融合pcr加入片段浓度怎么计算 -
伊炎凯18261541952 ______ 按照常规PCR方法进行各目的片段的独立扩增.扩增使用PfuDNAPolymerase,各片段扩增的反应条件及扩增产物长度如表2所示.扩增产物用0.8%的琼脂糖凝胶电泳检测,确定目的条带,切胶GelExtraction MiniKit回收.凝胶制备过程中减少EB的加入量,要 求EB浓度一般低于0.15 μg/ml.

郁亨学1907有用过博陵科为的两步法荧光定量反转录PCR试剂盒 的吗? -
伊炎凯18261541952 ______[答案] 博凌科为的两步法荧光定量反转录试剂盒由 两个试剂盒组合而成.一 个是反转录第一链合成 试剂盒 TUREscript 1st Strand cDNASynthesis Kit(PC18),一个是 2 x SYBR Green qPCR Mix(PC33).首先由反转录第一链试剂盒合成 cDNA,然后以 cDNA ...

郁亨学1907RT - PCR中用一步法还是两步法好一些 -
伊炎凯18261541952 ______ 挤出型坯及注射型坯,共挤出多层型坯及共注射多层型坯,都可选择一步法或二步法,进行双向拉伸吹塑成型.下面以pEr['瓶成型为例,说明一步法与二步法各自的优点和缺点. (1)一步法的优点. ①投资成本少,所有工序都可在一台机器中完成. ②如果生产同样形状而容量不同的容器,转换生产相对容易,适于相对小批量的生产. ③瓶子表面缺陷少. ④型坯所经受的热历程较短,有利于热敏性塑料的生产. (2)一步法的缺点. ①不能分开优化注射成型或吹塑成型的加工过程,因为这两种成型工艺在一步法中是相互依存的. ②型坯制成后就必须吹制,不吹瓶就不能生产型坯;企业要有较大的储存瓶的能力. ③所生产的瓶的瓶壁相对较厚. ④当某系统的装置有故障时,总产量也下降.

郁亨学1907反向PCR怎么做 -
伊炎凯18261541952 ______ 反向pcr(inverse pcr)反向pcr是一种多聚合酶链式反应(pcr)应用的方法,可使已知序列的核心区边侧的未知rma成几何级数扩增.用适当的限制性内切裂解含核心区的rma,以产生适合于pcr扩增大小的片段,然后片段的末端再连接形成环状分子.pcr的引物同源于环上核心区的末端序列,但其方向可使链的延长经过环上的未知区而不是分开引物的核心区.这种反向pcr方法可用于扩增本来就在核心区旁边的序.

郁亨学1907高手帮我设计一下序列引物,我要PCR这整段序列: -
伊炎凯18261541952 ______ 你没有告诉我最终要导入哪种受体细胞里,所以不知道给你选什么载体合适,也就没法给你酶切位点,因此默认给你连T载体.该片段是人类basigin的mRNA,因为你要的是全部片段,因此我设计引物的时候必须是最头尾部开始,这一对儿引物...

郁亨学1907一步法和两步法RT - PCR的根本区别?如题RNA---逆转录酶---cDNAcDNA--转录酶-----DNA是不是一步法就是两个步骤在一起做,那要加两种酶是吗? -
伊炎凯18261541952 ______[答案] 两步法有中间产物cDNA,但稍微麻烦一点;一步法简单,但得不到cDNA.

郁亨学1907你好!请教个问题,巢氏PCR的第一对引物可以用作普通PCR的产物吗?非常感谢~ -
伊炎凯18261541952 ______ 不可以.引物只是小片段序列,pcr产物一般都是比较长的dna分子.巢式pcr其实就是普通pcr基础上多了一对引物,从而保证pcr复制的精准.