原生质体的功能特点
转染 ，是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术。随着基因与蛋白功能研究的深入，转 染目前已成为实验室工作中经常涉及的基本方法。转染大致可分为物理介导、化学介导和生 物介导三类途径。电穿孔法、显微注射和基因枪属于通过物理方法将基因导入细胞的范例； 化学介导方法很多，如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法、和多种阳离子物质介导的 技术；生物介导方法，有较为原始的原生质体转染，和现在比较多见的各种病毒介导的转染 技术。 理想细胞转染方法，应该具有转染效率高、细胞毒性小等优点。病毒介导的转染技术，是目 前转染效率最高的方法，同时具有细胞毒性很低的优势。但是，病毒转染方法的准备程序复 杂，常常对细胞类型有很强的选择性，在一般实验室中很难普及。其它物理和化学介导的转 染方法，则各有其特点。 需要指出的一点，无论采用哪种转染技术，要获得最优的转染结果，可能都需要对转染条件 进行优化。影响转染效率的因素很多，从细胞类型、细胞培养条件和细胞生长状态，到转染 方法的操作细节，都需要考虑。
一、细胞传代
1. 试验准备：200ul/1mlTip 头各一盒(以上物品均需高压灭菌)，酒精棉球，废液缸，试管 架，微量移液器，记号笔，培养皿，离心管。
2. 弃掉培养皿中的培养基，用 1ml 的 PBS 溶液洗涤两次。
3. 用 Tip 头加入 1ml Trypsin 液，消化 1 分钟(37℃，5%CO2 )。用手轻拍培养瓶壁，观察 到细胞完全从壁上脱落下来为止。
4. 加入 1ml 的含血清培养基终止反应。
5. 用 Tip 头多次吹吸，使细胞完全分散开。
6. 将培养液装入离心管中，1000rpm 离心 5min。
7. 用培养液重悬细胞，细胞计数后选择 0.8X106 个细胞加入一个 35mm 培养皿。
8. 将合适体积完全培养液加入离心管中，混匀细胞后轻轻加入培养皿中，使其均匀分布。
9. 将培养皿转入 CO2 培养箱中培养，第二天转染。
二、细胞转染
1. 转染试剂的准备
① 将 400ul 去核酸酶水加入管中，震荡 10 秒钟，溶解脂状物。
② 震荡后将试剂放在－20 摄氏度保存，使用前还需震荡。
2. 选择合适的混合比例(1：1－1：2/脂质体体积：DNA 质量)来转染细胞。在一个转染管 中加入合适体积的无血清培养基。加入合适质量的 MyoD 或者 EGFP 的 DNA，震荡后在加 入合适体积的转染试剂，再次震荡。
3. 将混合液在室温放置 10―15 分钟。
4. 吸去培养板中的培养基，用 PBS 或者无血清培养基清洗一次。
5. 加入混合液，将细胞放回培养箱中培养一个小时。
6. 到时后，根据细胞种类决定是否移除混合液，之后加入完全培养基继续培养 24－48 小 时。
三、第二次细胞传代
1. 在转染后 24 小时，观察实验结果并记录绿色荧光蛋白表达情况。
2. 再次进行细胞传代，按照免疫染色合适的密度 0.8X105 个细胞/35mm 培养皿将细胞重 新转入培养皿中。
3. 在正常条件下培养 24 小时后按照染色要求条件固定。
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杭货隶3947原生质与原生质体的区别 -
扶玲伊19674397821 ______ 1、细胞不同:原生质是动植物细胞都具有的,而原生质层仅存在于成熟的植物细胞中. 2、特点不同:在成熟的植物细胞内原生质层是由细胞膜、液泡膜以及两膜之间的细胞质组成的,原生质层不包括细胞核和液泡内的细胞液. 3、成分不同:...
杭货隶3947原生质体是啥东西?和原生质层有啥区别?
扶玲伊19674397821 ______ 原生质层是成熟的植物细胞才具有的结构,由细胞膜、液泡和它们之间的细胞所构成,其作用相当于半透膜.具有选择透过性,它在水分的代谢中具有重要作用,主要进行渗透吸水.原生质体是指去掉细胞壁剩下的细胞结构.植物细胞培养中,用纤维素酶处理可以得到原生质体.细菌也可以用酶处理去掉细胞壁得到原生质体.
杭货隶3947酶、细胞、原生质体固定化 -
扶玲伊19674397821 ______[答案] 酶的一些不足之处: (1)酶的稳定性较差 (2)酶的一次性使用 (3)产物的分离纯化较困难 ◆改善方法之一就是固定化... 常用的凝胶有:琼脂凝胶、海藻酸钙凝胶、角叉菜胶和光交联树脂等. 3.3固定化原生质体的特点: (1)固定化原生质体由于...
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扶玲伊19674397821 ______ 区别一、分布范围不同 原生质层指成熟的植物细胞;原生质体指植物细胞、原核生物细胞中有细胞壁的细胞. 区别二、主体不同 原生质层指的是细胞膜、液泡膜和介于这两层膜之间的细胞质; 原生质体是指除去细胞壁的被细胞膜包围的“裸露...
杭货隶3947原生质体,质体是什么呢? -
扶玲伊19674397821 ______ 原生质体(potoplast) 脱去细胞壁的细胞叫原生质体, 是一生物工程学的概念.如植物细胞和细菌(或其它有细胞壁的细胞)通过酶解使细胞壁溶解而得到的具有质膜的原生质球状体.动物细胞就相当于原生质体. 质体(plastid) 质体是植物细胞中由双层膜包裹的一类细胞器的总称, 存在于真核植物细胞内.质体由两层薄膜包围,可以随细胞的伸长而增大,是植物细胞合成代谢中最主要的细胞器.根据质体内所含的色素和功能不同,质体可分为白色体、有色体和叶绿体.这类细胞器都是由共同的前体:前质体分化发育而来, 包括:叶绿体、白色体、淀粉质体、有色体、蛋白质体、油质体等.有些质体具有一定的自主性, 含有DNA、RNA、核糖体等.
杭货隶3947什么是“原生质体”? -
扶玲伊19674397821 ______ 原生质体 革兰氏阳性菌经溶菌酶或青霉素(也可用果胶酶以及纤维素酶)处理后,可完全除去细胞壁,形成仅由细胞膜包住细胞质的菌体. 植物细胞用果胶酶以及纤维素酶处理后,可完全除去细胞壁,形成仅由细胞膜包住细胞质的体系. 原生质体(protoplast) 脱去细胞壁的细胞叫原生质体, 是一生物工程学的概念.如植物细胞和细菌(或其它有细胞壁的细胞)通过酶解使细胞壁溶解而得到的具有质膜的原生质球状体.动物细胞就相当于原生质体(但与原生质体有一定区别). 原生质体由原生质分化形成,具体包括细胞膜和膜内细胞质及其他具有生命活性的细胞器,植物和动物的如细胞核、线粒体和高尔基体等;而细菌如核糖体、拟核等.
杭货隶3947原生质、原生质层、原生质体的区别
扶玲伊19674397821 ______ 原生质层,----包括细胞膜,液泡膜以及两层膜之间的细胞质.不包括细胞核和液泡中的细胞液 原生质---------细胞内的生命物质,一个动物细胞就是一团原生质.植物细胞除细胞壁以外的部分都是原生质,植物细胞只有细胞壁不是原生质. 原生质体-----专指去除细胞壁的植物细胞,对植物细胞而言,原生质体就是原生质. 原生质滴-----精子形成的过程中,细胞核变为精子的头,高尔基体发育成头部的顶体,中心体演变成精子的尾,线粒体演变成线粒体鞘.细胞内的其他物质浓缩为球状,叫做原生质滴.原生质滴随着精子的成熟向后移动,最后脱落.
杭货隶3947原生质体,原生质层的概念,如果可以,比较一下它们的特征, -
扶玲伊19674397821 ______[答案] 原生质层是细胞核和细胞壁之间的细胞质,原生质体就是去除细胞壁的细胞,原生质可以理解为动物细胞
杭货隶3947原生质与后生质的区别有哪些?
扶玲伊19674397821 ______ 原生质(plasma)并不是一种化合物,而是有多中化合物组成的复杂胶体,他具有不断自我更新的能力而成为一种生命物质的体系.目前认为,原生质是生命的物质基础....
杭货隶3947细胞壁对细胞具有什么作用
扶玲伊19674397821 ______ 1、维持细胞形状,控制细胞生长细胞壁增加了细胞的机械强度,并承受着内部原生质体由于液泡吸水而产生的膨压,从而使细胞具有一定的形状,这不仅有保护原生质体...