双酶切法的意义

计胆蓓4421为什么双酶切可以避免自身环化? -
通凤波18018355525 ______ 酶有特异性,不同的没切后粘性末端不同.双酶切之后,由于用的两种酶切出来的粘性末端序列不一样,所以一般载体不会再自连.http://baike.baidu.com/link?url=FRJwp9TS7OdIFmR3MFvoTwtr-FgAHQ8RazP9a560Z_idgLhSHbjoC4Y2...

计胆蓓4421为什么用两种酶的时候可以使目的基因和质粒准确结合? -
通凤波18018355525 ______[答案] 我想你说的是双酶切连接体系,这是因为一般选择双酶切连接时,两个酶的突出粘端是不同的,而连接时,需要首先碱基配对,然后T4连接酶将其gap连接起来,因此不同的配切后产生的粘端不能配对,而只有同一个酶切产生的粘端可以...

计胆蓓4421构建载体时为什么用双酶切而不用但酶切 -
通凤波18018355525 ______ 有两个方面,一是载体本身酶切不充分,没有完全切开;二是去磷酸化不充分.

计胆蓓4421为什么双酶切可以防止基因的自连,为什么为什么!!! -
通凤波18018355525 ______ 所形成的切口不同 使切口碱基不能自我互补配对

计胆蓓4421同时做双酶切和单酶切鉴定有什么好处 -
通凤波18018355525 ______ 以环状质粒为例,一般可以采用第一个酶酶切后割胶回收进行第二个酶的单酶切、直接双酶切两种 单酶切:一个一个切,第一次环变直线,第二次,直线变两段 双酶切:直接会有两段 还有一种,完全弥散,没条带,即酶量过了.

计胆蓓4421质粒DNA提取方法比较时,需不需要进行双酶切或者单酶切,为什么? -
通凤波18018355525 ______ 最好是用两种不同的限制酶切,如果用一种酶切割质粒,那么在质粒与目的基因碱基互不配对时就会因为质粒,目的基因都是相同的粘性末端而形成质粒-质粒,目的基因-目的基因这两种错误的组合. 所以最好用两种酶.形成不同的粘性末端,这样增加了质粒—目的基因配对成功的可能性.

计胆蓓4421基因,为什么要给目的基因添加限制性酶切位点 -
通凤波18018355525 ______ 这是为了后续构建载体时,用限制性酶去切出粘性末端.然后用连接酶把目的基因构建到相应的载体中.

计胆蓓4421双酶切防止目的基因反接 -
通凤波18018355525 ______ 双酶切以后目的基因上是有标记基因的,所以看是否有标记基因就能判断是否导入了多余基因.单切酶的话同理,如果是一个切割位点就更没问题了.

计胆蓓4421双酶切好还是分步酶切好 -
通凤波18018355525 ______ 两种酶的restriction buffer一样的话,就双酶切;如果不一样,那就没办法了,只能分步酶切.

计胆蓓4421双酶切好还是分步酶切好 -
通凤波18018355525 ______[答案] 两种酶的restriction buffer一样的话,就双酶切;如果不一样,那就没办法了,只能分步酶切.