双酶切缺点

郦苑富4414双酶切,试验中还要注意什么 -
严奚饱17177374151 ______ 双酶切,试验中要注意 做转化的时候,进行酶连接反应时,需要注意保持低温状态,因为LIGASE酶很容易降解.为保险起见,一般连接3小时16度. 对含有AMP RESISTENCE的质粒铺板时,注意加AMP时的温度,温度过高,会使克隆株无法筛选出来.可以培养基高温消毒后放在烤箱里,烤箱一般温度为60度,然后做的时候拿出来,这样好掌握温度.铺板前后注意用吹风机吹干. 对照的设立:为验证双酶切是否成功,可做如下对照:酶切反应时加各单酶分别切,两管,用同一种BUFFER,跑胶,看单切的两管是否成线性,如两管均成线性可初步判断双酶切成功. 做转化时,也要进行对照.

郦苑富4414双酶切体系是什么意思 -
严奚饱17177374151 ______ 双酶切反应 (Double Digests) 1、同步双酶切 同步双酶切是一种省时省力的常用方法.选择能让两种酶同时作用的最佳缓冲液是非常重要的一步.NEB每一种酶都随酶提供相应的最佳NEBuffer,以保证100%的酶活性.NEBuffer的组成及内切酶在...

郦苑富4414用于ELISA检测相应的抗原)需要纯化吗 -
严奚饱17177374151 ______ 用于ELISA检测相应的抗原)需要纯化 ELISA实验所有方法的缺点很明显:1、重复性不好;2、收自身抗体、嗜异性抗体等干扰,易出现假阳性;3、不论仪器和手工操作,干扰因素较多.影响最大的是温度和时间.1、直接法(direct ELISA) ...

郦苑富4414两个相邻的酶切位点用双酶切能切开吗 -
严奚饱17177374151 ______ 两个酶只相当于一个酶要具体看这两个酶的序列之间隔了多少个bp;还有就是如果这两个酶共用碱基的话就不行,有些酶的话隔的太近的话双酶切效率很低,需要分别单酶切

郦苑富4414双酶切防止目的基因反接 -
严奚饱17177374151 ______ 双酶切以后目的基因上是有标记基因的,所以看是否有标记基因就能判断是否导入了多余基因.单切酶的话同理,如果是一个切割位点就更没问题了.

郦苑富4414双酶酶切久了会把目的片段切断 -
严奚饱17177374151 ______ 正常情况是不会的,除非混入了别的酶,或者放置时间超常,长菌了.

郦苑富4414载体上临近的两个酶切位点可以设计起来做双酶切吗 -
严奚饱17177374151 ______ 要具体看这两个酶的序列之间隔了多少个bp,有些酶的话隔的太近的话双酶切效率很低,需要分别单酶切;还有就是如果这两个酶共用碱基的话就不行,两个酶只相当于一个酶.

郦苑富4414单酶切和双酶切的定义分别是什么?它们有什么不同? -
严奚饱17177374151 ______ 单酶切就是只用一个限制性内切酶去切你的质粒,环状的质粒就成为线状的了,但质粒的大小不变双酶切用两个限制性内切酶,质粒上就产生了两个缺口,环状质粒就变成两段线状DNA了.回收你需要的那一段,因为它的两端和你的目的基因带有互补的黏性末端(当然目的基因也要用这两种酶切才行),在T4DNA连接酶在作用下,它们就连到一起了.你该看看《生物化学》或基因工程方面的书.这都是基本的知识啊.

郦苑富4414pcr扩增出的片断正确但双酶切结果却偏大,不只是为什么?请高手指点?我的酶切底物是构建好的质粒载体.原来还酶切的正确但自从转菌之后再提取质粒... -
严奚饱17177374151 ______[答案] 可能是质粒在转菌后部分碱基出现错配或者突变导致你酶切的位置发生变化.因为你pcr扩增只是你引物的位置只要不突变就可以正常扩增.建议你做个测序.