双酶切鉴定

杭婵彩4725双酶切时,PCR样为何需纯化? -
鬱骆贝15360337006 ______ 首先,你用的是质粒模板;其次,你扩增得到的非单一条带,如果不纯化直接酶切,那么得到的将是带有相应酶切位点的几种片段,继续试验的话,菌落PCR鉴定时可能会出现几种不同大小的条带,运气好的话也会有阳性克隆.你也可以做个试验尝试下.

杭婵彩4725双酶切体系是什么意思 -
鬱骆贝15360337006 ______ 双酶切反应 (Double Digests) 1、同步双酶切 同步双酶切是一种省时省力的常用方法.选择能让两种酶同时作用的最佳缓冲液是非常重要的一步.NEB每一种酶都随酶提供相应的最佳NEBuffer,以保证100%的酶活性.NEBuffer的组成及内切酶在...

杭婵彩4725什么是酶切分析,有什么作用啊 -
鬱骆贝15360337006 ______ 酶切分析就是用一定的内切酶去酶切DNA,然后观察酶切产物大小,来确定自己的样品DNA是否正确的分析方法.

杭婵彩4725设计Ecor I和BamH I双酶切的目的是什么 -
鬱骆贝15360337006 ______ 是为了切出合适的粘性末端进行下一步的连接.将载体和目的基因用同样的酶进行酶切后,留出相同粘性末端进行连接

杭婵彩4725单酶切和双酶切的定义分别是什么?它们有什么不同?做实验的时候要把400bp目的片断连到pcDNA3.1(+)质粒中去:单酶切质粒后用T4 DNA连接酶连接... -
鬱骆贝15360337006 ______[答案] 单酶切就是只用一个限制性内切酶去切你的质粒,环状的质粒就成为线状的了,但质粒的大小不变双酶切用两个限制性内切酶,质粒上就产生了两个缺口,环状质粒就变成两段线状DNA了.回收你需要的那一段,因为它的两端和你的目...

杭婵彩4725载体是否双酶切完全 -
鬱骆贝15360337006 ______ 原载体质粒回收后电泳可能出现三条带 环状质粒、复制中间体、开环的质粒.复制中间体的大小接近质粒的两倍,开环的质粒跑的比环状的要快,在质粒的上方.不知你说的是哪两条; 双酶切看你的酶切位点设在哪里,理论上应该切下两个片段,如果两个片段大小上差距不大则电泳时很难分开,就是一条带了,如果切下的小片段很小,在电泳图上也很难显示;一般质粒双酶切不会出现这两种情况,所以我认为如果切开了应该是两条比较亮的带,上面的那条应该比下面的那条稍亮. 总之,应该设置没有切开的质粒做对照,做个比较就知道了; 希望对你有用

杭婵彩4725克隆为什么要双酶切啊? -
鬱骆贝15360337006 ______ 也可以单酶切,但是这种单酶切实在找不到合适的双酶后才用.因为单酶切的末端相同质粒会自连.形成空质粒,而且连入的方向有两种,后期还要进行选择.双酶切就不存在这种问题.

杭婵彩4725怎么对提取质粒进行鉴定? -
鬱骆贝15360337006 ______ 首先跑一个琼脂糖凝胶电泳,观察一下带型和大小是否符合,然后根据质粒所含有的酶切位点,选择合适的限制性内切酶进行单酶切或双酶切,观察酶切后的条带数和大小是否与理论一致.

杭婵彩4725单酶切和双酶切的定义分别是什么?它们有什么不同? -
鬱骆贝15360337006 ______ 单酶切就是只用一个限制性内切酶去切你的质粒,环状的质粒就成为线状的了,但质粒的大小不变双酶切用两个限制性内切酶,质粒上就产生了两个缺口,环状质粒就变成两段线状DNA了.回收你需要的那一段,因为它的两端和你的目的基因带有互补的黏性末端(当然目的基因也要用这两种酶切才行),在T4DNA连接酶在作用下,它们就连到一起了.你该看看《生物化学》或基因工程方面的书.这都是基本的知识啊.