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哪种rna分子量最小

来源:baiyundou.net   日期:2024-09-25

一、实验目的

掌握植物总 RNA 非变性胶电泳的原理和方法。

二、实验原理

RNA 电泳可以在变性及非变性两种条件下进行。非变性电泳使用 1.0%--1.4%的凝胶,不 同的 RNA 条带也能分开,但无法判断其分子量。只有在完全变性的条件下,RNA 的泳动 率才与分子量的对数呈线性关系。因此要测定 RNA 分子量时,一定要用变性凝胶。在需快 速检测所提总 RNA 样品完整性时,配制普通的 1%琼脂糖凝胶即可。

 

三、实验材料、器具及药品

蘑菇的总 RNA 溶液。  电泳仪,电泳槽,电子天平,移液器,枪头,微波炉,紫外透射检 测仪等。  琼脂糖,1XTAE 电泳缓冲液,0.5μg/ml 溴化乙锭(EB)10X 载样缓冲液。

四、实验步骤

(1)用 1×TAE 电泳缓冲液制作琼脂糖凝胶,加 1×TAE 电泳缓冲液至液面覆盖凝胶。

(2)在超净工作台上,用移液器吸取总 RNA 样品 4μl 于封口膜上。在实验台上再加入 5μl 1×TAE 电泳缓冲液及 1μl  的 10X 载样缓冲液,混匀后,小心加入点样孔。

(3)打开电源开关,调节电压至 100V,使 RNA 由负极向正极电泳,约 30min 后将凝胶

放入 EB 染液中染色 5min,用清水稍微漂洗。在紫外透射检测仪上观察 RNA 电泳结果。

RNA 的变性琼脂糖凝胶检测

试剂:

(1)MOPS 缓冲液(10*):0.4mol/L  吗啉代丙烷磺酸(MOPS) (Ph7.0),0.1mol/L NaAc,10mol/L EDTA。

(2)上样染料:50%甘油,1mmol/L EDTA ,0.4%溴酚蓝,0.4%二甲苯蓝。

(3)甲醛。

(4)去离子甲酰胺。v  电泳槽清洗:去污剂洗干净(一般浸泡过夜)——水冲洗——乙醇干燥——3%H2O2 灌满——室温放置 10 分钟——0.1%DEPC 水冲洗。

操作:

(1)  将制胶用具用 70%乙醇冲冼一遍,晾干备用。

(2) 配制琼脂糖凝胶。

①称取 0.5g 琼脂糖,置干净的 100ml 锥形瓶中,加入 40ml 蒸馏水,微波炉内加热使琼脂糖彻底溶化均匀。

②待胶凉至 60--70  ℃,依次向其中加入 9ml 甲醛、5ml 10X MOPS 缓冲液和 0.5ul 溴化乙锭,混合均匀。

③灌制琼脂糖凝胶。

(3) 样品准备:

① 取 DEPC 处理过的 500ul 小离心管,依次加入如下试剂: 10x MOPS 缓冲液  2ul,甲醛 3.5ul,甲酰胺(去离子)10ul,RNA  样品 4.5ul,混匀。

② 将离心管置于 60℃水浴中保 10 分钟,再置冰上 2 分钟。

③  向管中加入 3ul 上样染料,混匀。

(4)上样。

(5)电泳:电泳槽内加入 1XMOPS 缓冲液,于 7.5V/ml 的电压下电泳。

(6)电泳结束后,在紫外灯下检查结果。

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(编辑:自媒体)
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