封闭用bsa浓度

逯心志1724关于如何确定Elisa最佳效果的问题 -
韩陈星13583892083 ______ 这个确实有好几种因素来确定,双抗夹心的话,应该有:包被抗体的浓度、缓冲液的选择、孵育时间等好几种因素,你要测试最佳的效果,就要控制变量的方法来确定! 一般来说,如果你是夹心法的话主要要用棋盘法确定一抗和抗原的浓度,...

逯心志1724酶标板的蛋白质吸附性怎么测是用ELISA吗 -
韩陈星13583892083 ______ ELISA检测系统可谓是免疫学反应应用到科研生产中最为广泛最为灵敏的技术手段.可是在新老手操作过程中总是会出现或大或小的问题,本人在刚开始做ELISA时就面临很多困难,虽然有师兄师姐铺路,但还是常常做得一塌糊涂,比如说花板...

逯心志1724双缩脲法测定蛋白质含量需注意哪些问题 -
韩陈星13583892083 ______ 双缩脲试剂由NaOH溶液(0.1g/mL)和CuSO₄溶液(0.01g/mL)配制而成,配制比例为5:1.但是双缩脲试剂不用现配现用,先加入NaoH营造碱性环境,再加入CuSO₄. 双缩脲反应主要涉及肽键,因此受蛋白质特异性影响较小.且使用试剂...

逯心志172420%BSA应该怎么配置 -
韩陈星13583892083 ______ 这是w/v浓度.20%BSA的配制方法:在无菌条件下,称取20.00克牛血清白蛋白(BSA),用DMEM培养基[DMEM(高糖)购自Gibco BRL公司]溶液溶解后定容到100毫升,调pH值至7.4后用0.45 um滤膜过滤除菌...

逯心志1724生物素亲和系统可以用bsa封闭吗 -
韩陈星13583892083 ______ 封闭不当反而会使阴性本底增高,操作时洗涤彻底,取决于 ELISA 的模式及具体的实验条件,业已起到了类似封闭剂的作用.5%的牛血清白蛋白,封闭一般是不可少的(见2,而且封闭后的载体不易长期保存,吸收后固相载体表面尚有未被占据...

逯心志1724如何降低elisa中gst蛋白背景 -
韩陈星13583892083 ______ ELISA实验的原理似乎很简单,不外乎固定抗原,添加一抗、二抗和底物,间中夹杂着洗涤和封闭.然而,即使是平淡无奇的洗涤和封闭,如果做得不太好,也有可能毁了整个实验.在实验结束时,我们是否能获得有意义的信息,这在很大程度...

逯心志1724WESTERN BLOT实验中转膜时滤纸和膜的大小有什么要求?是滤纸比膜小对吧?为什么? -
韩陈星13583892083 ______ 你的问题好多啊 1 滤纸是上下都有的 之所以小一点儿 是怕上下的滤纸边缘直接短路,相连导致电子不能从胶穿过,这样不能达到很好的转移效率 2 可以用BSA,具体多大浓度,可以参照脱脂奶粉的 3 这个检测没多大用处吧 如果非要探讨这个问题 可以拿转完的胶再去染色(考马斯亮蓝或银染) 4 显色系统 基本就是HRP催化的DAB TMB等,AP催化的(NBTBCIP,我用的是roche的),也可以用HRP,AP催化化学发光,比如GE(原来的阿马西亚)的ECL(这个系统我没用过),赛默(原来的pierce)的化学荧光(我用过这个做southern)

逯心志1724WB加完发光液暗室里可见整张膜都发光,是为什么呀?膜用百分之五的BSA封闭过夜的! -
韩陈星13583892083 ______[答案] 如果整张膜都发光,压片后胶片上没有条带,整个一片都是黑乎乎的,应该是曝光过度了,和封闭没有太大关系.建议改进方法:降低上样量、降低一抗或二抗浓度、降低抗体孵育时间、改用效果不那么强的发光液(如果只有一种发...

逯心志1724免疫荧光中如果要封闭抗原 是用BSA吗 多少浓度 在孵育一抗前 还是之后? -
韩陈星13583892083 ______ 大多数都用5%BSA,其实和二抗来源一致的血清都可以,在一抗孵育之前.中洪博元技术实验为您解答

逯心志1724用于封片的bsa溶液需要灭菌吗 -
韩陈星13583892083 ______ 用于封片的bsa溶液需要灭菌 只是有缓冲作用,不是缓冲液,缓冲液是强碱弱酸盐-弱酸或强酸弱碱盐-弱碱构成的溶液体系,硼砂是四硼酸钠,属于强碱弱酸盐,只有对酸的缓冲作用,对碱的缓冲作用很弱.计算PH值的话,需要知道四硼酸的电离常数Ka,设其为二元酸,则硼砂溶液PH值为7+0.5lg(c/Ka),c为溶液浓度,该式适用于不是特别稀的溶液.