引物与模板的关系

骆杨窦1159超长引物PCR -
喻德哲18923135418 ______ 1.PCR反应的成功与否不与oligos的大小直接相关,主要看你的primer与模板特异性结合序列有多少个碱基对.虽然你的引物有97bp长,但和模板结合的位置可能仍旧只是20-30bp左右,计算退火温度时,只拿这20-30bp计算就可以了,你引物剩...

骆杨窦1159从克隆载体上PCR出目的基因原理 -
喻德哲18923135418 ______ 克隆载体是环状双链DNA.PCR的原理: 首先,当热变性,模板双链分开成两条单链模板 然后,两条引物分别结合上各自的模板 聚合酶,催化dNTP等进行引物延伸,成为两对长链模板,由于延伸的时间只够完成目的基因的长度,是不足以完成整个环状的延伸的.所以得到模板的互补链是有头有尾的. 这是一个循环. 再热变性,刚刚由引物变成的模板,解开成两条单链.新引物分别结合到两条模板上,延伸.引物结合模板,不断的变成新模板. 当然,新模板以旧模板为模板合成.而引物特异性结合位点确定了新的模板的长度.

骆杨窦1159医学常识中PCR的实验步骤有哪些?
喻德哲18923135418 ______ PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成:模板DNA的高温变性:模板DNA经加热至94℃左右一定时间后,使模板DNA双链解离,使之成为单链,以便与引物结合.退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合.引物的延伸:DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA 链互补链.

骆杨窦1159PCR失败的原因及如何改善 -
喻德哲18923135418 ______[答案] PCR反应的五要素 1、引物 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度.理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增. 设计引...

骆杨窦1159PCR的引物怎样设计, -
喻德哲18923135418 ______[答案] PCR引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段,使其能有效地扩增模板DNA序列.因此,引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否. 要设计引物首先要找到DNA序列的保守区.同时应预测将要扩增的片段单链是否形成二级结构.如这个区...

骆杨窦1159PCR时为什么要加一对引物,只加一对中的一条会有什么问题 -
喻德哲18923135418 ______ 因为PCR第一步要95°加热使DNA变性得到两条单链作为PCR扩展的模板,模板序列不同,所以PCR时要加一对引物.只加一对中的一条扩展速度只有一半.

骆杨窦1159关于生物技术的问题 -
喻德哲18923135418 ______ PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物.PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成: ①模板DNA的变性:模板DNA经加热至93℃左右一定时间...

骆杨窦1159什么是引物? -
喻德哲18923135418 ______ [编辑本段]概念 引物,是一小段单链DNA或RNA,作为DNA复制的起始点,在核酸合成反应时,作为每个多核苷酸链进行延伸的出发点而起作用的多核苷酸链,在引物的3′-OH上,核苷酸以二酯链形式进行合成,因此引物的3′-OH,必须是游离...

骆杨窦1159PCR与LAMP的关系 -
喻德哲18923135418 ______ 这两个方法我感觉原理还差挺多的,LAMP,环介导等温扩增法,英文名称为loop-mediatedisothermal amplification,,是一种新型的核酸扩增方法,其特点是针对靶基因的6个区域设计4种特异引物,在链置换DNA聚合酶(Bst DNA polymerase...