感受态涂板几小时开始长菌

禹洁饲2304DNA重组试验中,为什么先加400 uL 不含抗生素的LB液体培养45分钟,再涂含抗生素的平板,如省略该步骤结 -
邬清春18782168972 ______ 不是为了长到一定浓度,那些量已经可以在平板上长出足够的菌落了.而且等od长到0.8也主要为了获得指数期的细胞,而不是为了菌的量.原因是刚转化完的感受态虽然含有了抗性基因,但它还未表达,如果马上把他涂到抗性平板上或接到含抗生素的液体培养基中就长不出来了.必须先在无抗生素的液体培养基中摇上45分钟左右,等抗性基因表达了再涂板.

禹洁饲2304感受态细胞复苏时加了氨苄 -
邬清春18782168972 ______ 转化本身就是要将质粒转进大肠,刚刚进入感受态细胞,还没有完全融合,就被你的抗生素给扼杀了!摇菌一小时目的一个是要扩大培养,另一个就是活化. 参考网址on http://doc.bio1000.com/show-3440.html

禹洁饲2304我转化农杆菌涂板时,菌长成了糊状,请问会是什么原因呢?抗生素是新买的,感受态细胞是大家都用的. -
邬清春18782168972 ______[答案] 菌液太多,没有吹干或者培养基里的水分倒回了板子上;感受态OD太高,细菌老化;感受态有杂菌污染;抗生素失效或浓度太低;转化的质粒加多了~~~

禹洁饲2304怎么检测BL21感受态
邬清春18782168972 ______ 取50ul感受态,涂一个无抗的板,要能长满板的菌落,最好>1000个,然后涂几个常见抗生素的板,比如Amp, Kan,最好一个菌落都没有,至少要<10个.

禹洁饲2304农杆菌感受态培养多长时间到OD600为0.5 -
邬清春18782168972 ______[答案] 这要看你的接种量的多少,还有菌种活力大小;一般来说如果挑单克隆要16~20h,当看到培养基变浑浊,可凭经验观察浑浊度.没有经验的只有用分光光度计测量OD600.

禹洁饲2304谁有做过大肠杆菌感受态细胞 -
邬清春18782168972 ______ 对照组被污染了,或者氨苄有问题,或者在配制培养基的时候在培养基还没冷却的时候就加了氨苄. 其实大肠杆菌感受态可以买的,又不贵.自己做太麻烦了. 我已经说了啊,可能是对照的大肠杆菌被污染了,或者这些大肠杆菌产生了突变,但是突变的频率不会很高啊.

禹洁饲2304怎样知道感受态细胞是否污染 -
邬清春18782168972 ______ 很简单:用感受态(不要转化)单独涂平板,看看是否有菌落生长.如果,有菌落生长,就是污染杂菌了.否则,没有污染.

禹洁饲2304用EcorI和SalI酶切目的基因和载体后酶连,然后转化DH5a,涂板后却不长菌,是为什么呢? -
邬清春18782168972 ______[答案] 用这两个酶没问题,你要确定几件事: 1 目的基因和载体都切开了吗?特别是目的基因如果是PCR后直接酶切效率会较低;载体上两个酶切位点连在一起吗? 2 感受态的效率问题 3 转化过程对不对,如抗生素加的对不对

禹洁饲2304怎样检验感受态细胞转化是否成功 -
邬清春18782168972 ______ 蓝白筛选的原理:质粒如pUC18上带有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的调控序列和头146个氨基酸(N端),而大肠杆菌的lac-突变型DH5α可编码β-半乳糖苷酶的C端,单独表达这两个片段均无β-半乳糖苷酶活性,同时表达两个片段可融和(α互补)...

禹洁饲2304用Cacl2制备感受态时,第一次加Cacl2后未悬浮细胞, 怎么解救啊 -
邬清春18782168972 ______ 问题不大,再用预冷CaCl2悬浮即可.