感受态细胞制备的意义

金融界2024年1月19日消息，据国家知识产权局公告，广州达安基因股份有限公司申请一项名为“用于富集微生物的甘露糖结合凝集素融合蛋白的制备方法“，公开号CN117417958A，申请日期为2022年7月。

专利摘要显示，本申请实施例属于病原微生物的高通量测序技术领域，涉及一种用于富集微生物的甘露糖结合凝集素融合蛋白的制备方法，包括构建甘露糖结合凝集素(MBL)氨基酸序列，将MBL氨基酸序列导入载体，得到重组质粒，其中，MBL氨基酸序列修饰有生物素；将重组质粒加入感受态细胞进行转化和质粒提取，得到目标质粒；将目标质粒转入CHO细胞中进行细胞转染，获得细胞表达物；对细胞表达物进行纯化，得到目标融合蛋白。本申请可以提高病原体微生物宏基因组的检测灵敏度。

本文源自金融界

隆呼凯2176感受态细胞的制备和转化中 为什么要加两次Cacl2? Cacl2为什么要预冷? -
蒋健瑾15637725210 ______ 感受态的制备,需要尽量排除杂质的污染,多次离心加CaCl2,只是为了使培养基尽量弃去. 感受态的整个制备过程都要求在冰上操作,CaCl2需要预冷是显然的操作,以最大限度保证细胞活性和转化效率.

隆呼凯2176制备感受态中,为什么用42摄氏度?而不是其他温度, -
蒋健瑾15637725210 ______[答案] 这个42℃的数值是经过技术条件优化而来的. 一开始,知道热激可以使细胞上吸附的DNA进入细胞内,增加转化效率,然后就开始用不同的温度做实验,发现热激温度低了,转化效率太低,温度高了,细菌抵抗不住,最后发现42℃热激的转化效率最...

隆呼凯2176什么是生发态细胞法,什么是感受态细胞法? -
蒋健瑾15637725210 ______ 感受态是经过钙离子处理的

隆呼凯2176感受态细胞的制备为什么加氨苄青霉素 -
蒋健瑾15637725210 ______ 加氨苄青霉素是选择作用,可以让导入了目的基因的细胞存活或死亡.如:导入受体细胞的基因表达载体上含有氨苄青霉素抗性基因则能存活,该抗性基因内部插入了目的基因则不能存活.

隆呼凯2176为什么制备大肠杆菌感受态细胞冰浴 -
蒋健瑾15637725210 ______ 因为你在加入钙离子之后,细胞很脆弱,需要低温,这样可以保护它.

隆呼凯2176制备的感受态效率低,如果使用会有什么不良影响吗? -
蒋健瑾15637725210 ______[答案] 摄取和容纳外来DNA的效果不太好 不利于将构建好的载体转入感受态细胞进行表达,不利于检验重组载体是否构建成功,最主要的是不利于感受态细胞作为重组载体的宿主可以进行后续实验,如蛋白质表达纯化等工作.

隆呼凯2176为什么制备感受态细胞是要挑单菌落 -
蒋健瑾15637725210 ______ 挑多个克隆也无所谓,单克隆的话,菌的性状稍微稳定些

隆呼凯2176制备感受态细胞时为什么强调无菌操作 -
蒋健瑾15637725210 ______ 因为感受态细胞转化之后的步骤是复苏,复苏时是不加任何抗生素的,有杂菌也会长起来. 还有就是感受态细胞本来状态就不是太好,在培养的过程中很有可能竞争不过杂菌.

隆呼凯2176制备感受态的时候,先前的CaCl2重悬细菌,然后再离心,最后在用100 - 200μlCaCl2重悬细菌,即可用于转化,那么先后两步用CaCl2的目的是否一样?不一... -
蒋健瑾15637725210 ______[答案] 目的一样,但两次可以充分达到制备感受态细胞的效果,造成一个低渗的环境.有条件当然需要超净工作台,但一个酒精灯也够了. 注意事项嘛:保持低温;据分子克隆介绍,做好的感受态细胞在4度冰箱过夜可提高转化效率;分装保存在低温冰箱,...

隆呼凯2176CaCl2法制备大肠杆菌感受态细胞原理?
蒋健瑾15637725210 ______ 原理:转化:将外源DNA分子引入受体细菌,使之获得新的遗传性状. 受体细菌一般是限制修饰系统缺陷的变异株,不含限制性内切酶和甲基化酶的突变体(R-,M-),可以容忍外源DNA分子进入体内并稳定地遗传给后代.受体细胞经过一些特...