提取rna过程中rna降解原因

TRIZOL是一种新型总RNA抽提试剂，可以直接从细胞或组织中提取总RNA。其含有苯酚、异硫氰酸胍等物质，能迅速破碎细胞并抑制细胞释放出的核酸酶。TRIZOL的主要成分是苯酚。TRIZOL在破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性，因此对纯化RNA及标准化RNA的生产十分有用。

TRIZOL是由Invitrogen（现在属于Thermo Fisher Scientific）公司开发的试剂。该公司于1992年推出了TRIZOL试剂，用于细胞和组织中核酸的提取。TRIZOL基于一种名为"acid guanidinium-phenol-chloroform"（酸性胍-酚-氯仿）的三重相分离方法。TRIZOL的开发源于20世纪70年代末和80年代初的研究工作。在当时，科学家们对于高质量的RNA提取方法感兴趣，因为高质量的RNA对于各种分子生物学研究非常重要。然而，传统的RNA提取方法受到DNA和RNA降解、样品丢失等问题的影响，提取效果不佳。为了克服这些问题，一个名为Chomczynski和Sacchi的科学家团队提出了酸性胍-酚-氯仿三重相分离方法。该方法基于胍的碱性特性，通过胍与DNA或RNA结合以避免降解。酚用于裂解细胞，并与酸性胍和核酸形成络合物，从而将核酸保护在有机相中。氯仿用于分离蛋白质和界面相中的DNA/RNA复合物。Invitrogen公司在Chomczynski和Sacchi的方法的基础上开发了TRIZOL试剂，并于1992年推出。TRIZOL在分子生物学研究中得到广泛应用，成为提取总RNA、DNA和蛋白质的常用试剂之一。

TRIZOL的主要成分是苯酚。苯酚的主要作用是裂解细胞，使细胞中的蛋白，核酸物质解聚得到释放。苯酚虽可有效地变性蛋白质，但不能完全抑制RNA酶活性，因此TRIZOL中还加入了8－羟基喹啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNase（RNA酶）。TRIZOL是从细胞和组织中提取总RNA的即用型试剂，在样品裂解或匀浆过程中，TRIZOL能保持RNA完整性。加入氯仿后，溶液分为水相和有机相，RNA在水相中。取出水相，用异丙醇可沉淀回收RNA。TRIZOL试剂是一种单步法的试剂，能够在一个试管中完成细胞裂解和核酸、蛋白质的提取。其作用原理可以分为以下步骤：

1.细胞裂解：TRIZOL试剂中含有酚，可以迅速破坏细胞膜，使RNA、DNA和蛋白质释放出来。

2.聚集：TRIZOL试剂中含有胍类化合物（如盐酸胍），可以使RNA和DNA在酚的存在下与胍形成络盐，从而使RNA和DNA聚集在有机相中，保护核酸不被降解。

3.盐析：TRIZOL试剂中的氯仿用于与有机相中的RNA/DNA络盐形成亲水相，从而将RNA/DNA精准分离出来。同时，蛋白质也会被分离到氯仿相中。

4.进一步纯化：得到的RNA/DNA可以通过洗涤、乙醇沉淀等方法进一步纯化，以获得高质量的核酸样品。

总体来看，TRIZOL试剂通过胍和氯仿的配合使用，可完成细胞/组织的裂解、RNA/DNA的提取和蛋白质的分离，具有操作简便、提取效率高、成本较低等特点，因而成为常用的核酸提取试剂之一。

检测小贴士！

在平时处理需要提取RNA的送测样品时，如果样本量过于少（比如细胞或者少量的菌体沉淀等样品），可以在去掉培养液后加入适量的TRIZOL后再进行样品寄送，可以减少样本降解的风险。血液样本除了可以加抗凝剂或用抗凝管寄送外，也可以按3mL血液样本加入9mL TRIZOL试剂的比例（1:3）混匀后寄送。

羿史杭4882RNA琼脂糖电泳时需要maker吗 -
空颖枫17040573889 ______ RNA跟DNA不一样,主要现象就是降解 1.提取过程中RNA出现降解 2.洗脱的时候洗掉了 3.18S有部分降解 4.弥散带说明降解严重,杂质过多 5.28S部分降解 RNA完美提出来的话应该是三条带:28,18,5.8 28和18比较亮而且28是18的2倍量 5.8基本很模糊可有可无

羿史杭4882从白细胞中提取RNA时,溶解之前RNA量较多,明显可以看到,测量浓度时却与观察到的相反,怎么回事? -
空颖枫17040573889 ______ 这个是你的实验操作有问题. 操作过程中引入了RNA酶,导致RNA被大量降解了,我以前做提取RNA时也经常出问题,要避免只能严格要求自己,保证实验过程的严谨了!

羿史杭4882我提取DNA后发现RNA过多,就加入了RNA酶,不到一星期我的DNA有严重的降解现象,会是RNA酶的原因吗 -
空颖枫17040573889 ______ 去RNA的过程当中就有很大可能会降解DNA 这与加入RNA酶的量也是有关系的 一般情况下提出质粒后可以37度水浴半个小时 大部分RNA就会被自动降解掉了 另外附送 所有DNA接触的环境体系 必须是偏碱性的,因为DNA易被酸水解. 仅供参考 谢谢

羿史杭4882如何去除DNA中的RNA -
空颖枫17040573889 ______ 要去除DNA中的RNA其实不是很难: 1,DNA、RNA按稳定性来说,由于DNA是双链,DNA的稳定性要远远大于RNA,所以RNA比较容易降解; 2,在提取DNA的过程中大部分的RNA会降解,因为RNA酶无处不在; 3,RNase A是一种被详细研究和具有广泛应用的核酸内切酶.RNase A 对核糖核酸有水解作用,但对脱氧核糖核酸则不起作用.核糖核酸酶A 在C端和U端残基处专一地催化RNA的核糖部分3'-与5' -磷酸二酯键的裂开,形成具有 2',3'-环磷酸衍生物寡聚核苷酸.可以用来去除DNA制品中的污染RNA; 4,所以要得到高纯度无RNA的DNA可以用RNase A(RNA水解酶A).

羿史杭4882为什么.trizol提取RNA 经典三条带显示rna完整性
空颖枫17040573889 ______ 电泳时,三条带中,核糖体RNA(rRNA)在距离胶孔较近的位置上,28s、18s为核糖体的大、小两个亚基,第三条带,也就是最下面那条为5.8s和5s(以上为真核生物).因为长度差距不大,故很难在电泳中区分出来. 在提取过程中,有时会出现RNA酶的污染,导致RNA降解.降解时,越大的RNA越容易降解,且降解为较小的片段,在电泳时也会跑得更快. 所以,电泳时,若缺失28s条带,28s条带亮度较弱,5s和5.8s条带变强或条带下方有弥散,则说明RNA完整性被破坏.且条带越弱,越模糊,说明RNA完整性越差,RNA中所含的信息就越不完整

羿史杭4882大家有没有好的提议:如何去除DNA中的RNA -
空颖枫17040573889 ______ RNA很容易降解的,加入RNA酶就可以了,其实RNA酶无处不在,如果提的是RNA,那就要注意了,RNA的仪器及耗材要用化学品特殊处理去除RNA酶,以免RNA被降解.

羿史杭4882怎样去除DNA中的RNA -
空颖枫17040573889 ______ 提纯DNA的过程中RNA都降解光光了,不用特意去除 因为RNA是单链,特别不稳定

羿史杭4882提取基因组RNA时,怎样避免产物降解? -
空颖枫17040573889 ______ 外源RNA酶清除剂,可以搞定.喷洒台面,浸泡处理耗材,去除外源RNA酶清除剂,避免其降解.

羿史杭4882液氮中存在RNA酶怎么办 -
空颖枫17040573889 ______[答案] 你到底想知道什么呢?你想知道液氮碾磨组织提取RNA时对RNA的降解吗?这个几乎为零,那么低的温度下RNA酶是不会起作用的

羿史杭4882土壤RNA提取需要注意什么?
空颖枫17040573889 ______ 一般来说从污泥、淤泥、森林土壤、河边土壤、稻田泥土、草地,、池塘泥土、竹林等土壤提取RNA比较难,因为土壤中的RNA含量少,而且RNA非常容易降解,残留的腐殖酸还会影响后续的实验.华越洋生物的超快土壤RNA提取试剂盒,提取速度快,避免了提取过程中RNA的降解;强效吸附剂可高效去除土壤样品中的各种抑制因子,如腐殖酸等.纯化的土壤RNA纯度高,可直接用于RT-PCR、Northern 杂交、cDNA合成等各种用途.