流动相甲醇与水的比例

All chemicals and solvent were HPLC. Standard: cytidine monophosphate (CMP), urid ylic acid (UMP), guanylic acid (GMP), hypoxanthine nucleotide (IMP), adenine nucleotide (AMP) and were purchased from xxx.

2.2 样品处理Sample Preparation

1) 将样品摇匀，称取0.5 g左右的样品；

2) 0.5 g样品加入xxx℃超纯水，充分震荡混匀，平衡至室温；

3) 分别按体积分数0.5%、1%、2%、3%、4%、5%比例加入xxx溶液，充分震荡混匀，放置20 min；

4) 加入超纯水定容至10 mL，6000 r/min离心10 min；

5) 将上清液移至新的离心管，加入10 mol/L氢氧化钾调节溶液的pH至7～8之间，混匀后放置20 min，6000 r/min离心10 min；

6) 取上清液用0.22 µm滤膜过滤，进样10 µL。

2.3 HPLC分析HPLC Analysis

本实验所用的仪器为Agilent 1200型高效液相色谱仪，配备二极管阵列检测器。

色谱柱为Agilent xxx (250 mm*4.6 mm, 5 μm)，流动相A为100 mmol/L xxx溶液（pH=5.6），B为甲醇，流速为1.0 mL/min，柱温为30℃。

3 结果Results

色谱图Chromatogram

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赫沈戚2008高效液相分析中流动相的毒性 -
明雁盲19524924530 ______ 正如上面说的:甲醇和乙腈的毒性都非常大,都容易挥发.甲醇可以致人失明甚至死亡,少量吸入的话视力也会逐渐退化,乙腈有致癌性! 但是做化学实验都有一定的毒性,分析方面接触的化学试剂比较少而且毒性相对较小,注意自身保护,没什么问题,比如配制试剂时戴手套,注意实验室通风,开排风扇等,没十分问题,你天天坐在电视机前或电脑前,一样有辐射,不用太担心,安心工作就是了!

赫沈戚2008液相色谱所用流动相使用时应注意哪些问题 -
明雁盲19524924530 ______ 1、流动相恢复到室温后使用.流动相温度与室温相差时,流动相在恢复到室温前,基线水平很难稳定,特别是发生漂移,也容易产生气泡等现象.水与有机溶剂混合时,混合液变化大,往往会与室温相差很大,务必注意. 2、做HPLC流动相的...

赫沈戚2008液相色谱仪测定叶片脱落酸含量,用旋转蒸发仪蒸发甲醇,怎么判断甲醇蒸发干净呢? -
明雁盲19524924530 ______ 45℃加热旋蒸时,你稍微加速快了些,石油醚都会有沸腾现象出现,它的蒸发是比较剧烈迅速的.甲醇旋蒸的速度也很快,一般你加个40度左右就足够了. 你可以观察持续一定时间冷凝部分都不再有液滴滴下,就可以认为蒸干净了.

赫沈戚2008请问流动相33:63:2(甲醇,水,冰醋酸)配成两个流动相比例应为多少? -
明雁盲19524924530 ______ 要注意的有两点: 1. 流动相中加酸的目的,是为了让酸性的目标物处于游离型,增加其被保留的能力. 2. 色谱柱如果长时间用PH较低的酸性流动相,它对酸性物质的保留特性会保持一段时间.也就是说,如果你以前采用的都是正常条件,偶尔有一次忘了在流动相中加酸,有可能对结果没有影响.如何判断检测结果是否正常可用?如果你是用外标法测2.4.6-三氯酚的含量,你可以对比以前正常状况下的保留时间和峰型(理论板数),若差异不大,结果应当是可以用的.你还可以用正常条件测一次,与之比对.

赫沈戚2008请教:HPLC流动相如何选择
明雁盲19524924530 ______ 对于一般的反相柱,用甲醇/水或乙腈/水作流动相. 甲醇/水作流动相时,如果得到的色谱图出的峰分的不完全,可以加大水的比例.如果出得峰太靠后而分离效果又不错,可加大甲醇的比例,可使峰出的早一些.对于一些难分离的物质,要选用乙腈/水作流动相.

赫沈戚2008判断正误:在反相HPLC中,若组分保留时间过长,可增加流动相中水的比例,使组分保留时间适当. -
明雁盲19524924530 ______ 错. 反向HPLC中流动相的梯度是极性从大到小,如水——甲醇,甲醇的比例逐渐增大,对小极性的物质洗脱能力逐渐增强. 反向柱中对小极性的物质保留较好,所以后洗脱.若组分保留时间长,则应加大有机相的比例,使之较快洗脱下来.

赫沈戚2008求助HILIC色谱柱跑出来的峰严重拖尾 -
明雁盲19524924530 ______ 出峰快结束的时候又出来一个不全的峰,对于这种情况,很有可能是你的柱子不干净,才用梯度洗脱法冲洗柱子.单元泵的话,用几个不同比例的流动相冲洗柱子,至基线稳定. 色谱柱走出来的峰型拖尾很严重,这个有好几种原因:流动相的比例,如甲醇:水的比例不一样,出峰时间和拖尾程度不一样的,还有你的柱型是否和检测物质匹配.我经常能遇到流动相的比例不同,分离度差别很大的情况.

赫沈戚2008甲醇和水混合作为流动相用过滤吗 -
明雁盲19524924530 ______ 不用过滤,这两者可以任何比例互相溶解

赫沈戚2008高效液相用到的流动相,什么情况下用油膜、什么情况下用水膜过滤(有机溶剂与水的比例?)
明雁盲19524924530 ______ 前面的回答有些模糊了,一般情况下,油膜和水膜是不能互用的.只要流动相中含有有机相,无论多少比例都应该用油膜来过滤,因为你流动相里面有有机相的情况下你还用水膜,有机相会把膜给溶解掉的.如果流动相中不含有机相,只是水或是缓冲液,那只能用水膜,因为你用油膜也过滤不动呀,基本都是一滴一滴的往下淌,呵呵. 当然也有一种通用的膜,这在购买时应该已经知道了. 最后如果你实在不确定用什么膜就实验一下,滴一滴有机溶剂比如甲醇,如果溶解就判断是水膜,不能使用了,就只能用专用油膜了,如果不溶解,那就用此膜就可以啦

赫沈戚2008甲醇:水(25:75)的流动相怎样冲洗 -
明雁盲19524924530 ______[答案] 体积比 ,将 25体积的甲醇和75体积的水混匀,用有机膜抽滤,超声脱气. 例如,要配100ml甲醇水,将 25ml的甲醇和75ml的水混匀,用有机膜抽滤,超声脱气.水最好是用纯化水或者新制蒸馏水.甲醇用色谱级甲醇.

（编辑：自媒体）