组建重组质粒
吉儿罚4854构建重组质粒 -
段翁玛17026869239 ______ 楼主设计引物的时候有加保护碱基吗,会不会切了PCR产物.1kb的目的基因不长不短.合成过程还要看序列的GC含量.如果有局部GC较高的区域,建议楼主分段合成.我之前自己合过几条3kb左右的序列,因为GC含量较高,试了很多种方案,差不多做了1个月.后面几条直接给金唯智合了,正常1kb左右的序列一周就能拿到了,楼主可以试一下.
吉儿罚4854如何构建一个基因的过表达载体 -
段翁玛17026869239 ______ 当拿到一个基因的DNA片段后,就需要把它导入一个载体,一方面长期保存.另一方面也需要以载体为媒介将基因导入受体细胞中.基因表达载体的构建是基因工程的核心. 常用的载体有细菌质粒,噬菌体和动植物病毒.其中质粒载体最常用...
吉儿罚4854目前所用的质粒载体主要是以天然细菌质粒的各种元件为基础重新组建的人工质粒,pBR322质粒是较早构建的质粒载体,其主要结构如图所示.(1)构建人... -
段翁玛17026869239 ______[答案] (1)质粒上的抗性基因可作标记基因,便于鉴定受体细胞中是否导入目的基因.(2)在目的基因的两侧各有1个EcoRⅠ的切点,即目的基因两侧有-GAATTC-,目的基因两侧被限制酶EcoRI切割后所形成的黏性末端为.(3)DNA连...
吉儿罚4854纤维素分子不能进入酵母细胞,为了使酵母菌能够利用环境中的纤维素为原料生产酒精,构建了含3种不同基因片段的重组质粒,如图所示是酵母菌转化及纤... -
段翁玛17026869239 ______[答案] (1)基因的表达包括转录和翻译两个步骤;菌株Ⅱ的纤维素酶不能分泌到细胞外,而菌株Ⅲ的纤维素酶分泌到细胞外,菌株Ⅳ... 合成的纤维素酶不能分泌到细胞外,细胞无可利用的碳源. (5)由于菌株Ⅳ导入的重组质粒含有A基因片段,使分泌的纤维...
吉儿罚4854为什么重组质粒的形成是在细胞外完成? -
段翁玛17026869239 ______ 首先,质粒是从大肠杆菌里提取的.质粒是最常用的运载体.而受体细胞之中没有质粒,当然就要先从大肠杆菌里提取出质粒,在体外构建表达载体,然后导入受体细胞. 其次,要对质粒进行切割.如果在体内完成,那么怎么对质粒进行切割然后把目的基因插进去?根本行不通啊. 所以说,表达载体的构建一定要在体外完成.操作方便.
吉儿罚4854(2011•松江区二模)科学家将外源目的基因与大肠杆菌的质粒进行重组,并在大肠杆菌中成功表达.如图表示构建重组质粒和筛选含目的基因的大肠杆菌的过程... -
段翁玛17026869239 ______[答案] (1)将质粒切割开用限制酶,将目的基因与质粒连接起来用DNA连接酶.(2)由图中限制酶切割位置可知,目的基因插入的位置是氨苄青霉素抗性基因中.(3)步骤③是基因工程第三步:将目的基因导入受体细胞.(4)培养...
吉儿罚4854如图表示利用某种细菌中提取的抗虫基因培养抗虫玉米的大致过程.请回答下列问题:(1)A过程所需的酶是___.构建重组质粒时,将抗虫基因连接到Ti质粒的... -
段翁玛17026869239 ______[答案] (1)A过程为示基因表达载体的构建过程,所需的酶是限制酶和DNA连接酶.图中D过程采用了农杆菌转化法,其原理是:农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA可转移至受体细胞,并且整合到受体细胞染色体的DNA上.根据农杆菌的这一特...
吉儿罚4854载体和目的基因分别经限制性酶切后,产生不同的3'突出粘性末端.设计实验方案,构建重组质粒. -
段翁玛17026869239 ______ 方法非常多,列举一两个: 1. 不同的粘性末端不能相连.所以,如果要相连,就要去除不同的粘性末端,进行平末端相连. 粘末端变成平末端有两种方法:klenow酶的补平或者s1核酸酶的切平. 为了减少载体自连,可以用碱性磷酸酶处理载体. 最后将载体和目的基因链接,构建重组质粒. 2. 设计引物,自带酶切位点,扩增目的基因,直接改变目的基因的酶切位点,然后再用和载体相同的限制酶酶切目的基因,切出相同的粘性末端. 直接将酶切完成的目的基因和载体连接.
吉儿罚4854(2014•金山区一模)图一为含有目的基因的DNA(外源DNA),图二为某质粒,表中是几种限制酶识别序列及其切割位点.用图中的外源DNA与质粒构建重组... -
段翁玛17026869239 ______[答案] (1)质粒切割前是双链环状DNA分子,所有磷酸基团参与形成磷酸二酯键,故不含游离的磷酸基团.从图1可以看出,质粒上只含有一个SmaⅠ的切点,因此被改酶切割后,质粒变为线性双链DNA分子,因每条链上含有一个游离的磷酸基团,因此切割...
吉儿罚4854质粒的构建过程 -
段翁玛17026869239 ______ 因为高拷贝质粒稳定性低,而且给宿主细胞的压力大. 低拷贝数的质粒DNA在宿主细胞分裂前只能复制1~2次,而多拷贝数质粒可以在细胞分裂前复制成10~200拷贝. 高拷贝数的质粒称为松弛型质粒(relaxed plasmid),独立于细菌细胞而自...