胎牛血清小牛血清
细胞培养是细胞生物学研究方法中最常用也是最重要的技术之一,在现代医学、生物科学、农业科学等领域被广泛应用以提供研究模型和实验材料。在细胞培养过程中,完全培养基对细胞生长状态起到关键作用,决定实验成功与否。而血清是完全培养基中的关键成分之一,除为细胞生长提供基本营养物质、结合蛋白、一些参与解毒代谢的微量元素和可起到中和保护的酶类之外,还可以保护细胞免受机械损伤,因此被业内认为是细胞增殖过程中最重要的试剂。在生命科学领域的细胞培养技术中,动物血清的应用十分广泛,特别是牛来源血清。而牛源血清又分为胎牛血清、新生牛血清和小牛血清,它们的区别方式主要由于牛龄和采血方式不同,其中胎牛血清因其抗体水平含量低对后续实验结果影响小、生长因子含量水平高利于细胞增殖而应用最广。因此关注胎牛血清的品级、质量以及使用过程的一些注意事项,会对实验结果起到直接影响作用,并可以确保科研人员在实验操作过程中的安全性。
今天我们就来看看在细胞培养过程中血清使用方面常见的问题,如:血清储存条件、如何程序解冻、细胞污染与血清之间的关系、传说中的“黑胶虫”是什么以及血清热灭活是否有必要等等,“工欲善其事,必先利其器”,通过今天的解析与学习可以让我们在做细胞培养相关实验时事半功倍!那我们就开始吧~
Q1. 血清长期储存的条件和方法
血清如需长期保存,则必须储存于-10℃或更低温冰箱中,建议存放于-20℃的冰箱中。研究表明储存在-80℃条件下的血清在性能方面变化不大,但由于解冻时温差过大,会导致析出更多沉淀,使得背景杂乱,因此血清长期保存不建议处于-80℃条件下。如果近期会频繁使用血清,我们建议不要在4℃条件下存放超过1个月,若一次无法用完整瓶建议分装后保存,且要避免反复冻融。另外,血清冰冻后体积会增加约10%,因此血清分装时请留意预留一定的体积空间。
Q2. 如何进行血清的程序性解冻?
程序性解冻血清可以确保血清制品质量的稳定性,且不会因为温差过大而析出过多蛋白等沉淀。程序性解冻方法是于实验开始之前将冷冻的血清置于4℃冰箱中融解,并且在解冻过程中每隔1小时摇匀一次,使温度与成分均一,减少沉淀析出,直至全部解冻,然后再移入室温条件下使用。
Q3.血清解冻后发现絮状沉淀该如何处理?
造成血清发生絮状沉淀的原因主要是血清解冻过程中温差带来了脂蛋白变性和纤维蛋白析出,沉淀本身不会影响血清质量,也不会对实验结果造成影响。但如必须处理沉淀,则可通过离心方式去除,如500-1000×g离心5-10 min。
Q4.血清沉淀是什么?
造成血清发生絮状沉淀的原因主要是血清解冻过程中温差带来了脂蛋白变性和纤维蛋白析出,沉淀本身不会影响血清质量,也不会对实验结果造成影响。但如必须处理沉淀,则可通过离心方式去除,如500-1000×g离心5-10 min。
Q5.血清中的小黑点是什么?
血清解冻过程温差过大、经反复冻融或通过热灭活处理后更容易产生沉淀,这些沉淀物在镜下观察时有一些会呈现以布朗运动的小黑点,业内流行一种“黑胶虫”污染的说法,但“黑胶虫”一直以来都是极为神秘的存在,至今科学家们也没有完整的实验结果可以证实它究竟是一种生物还是非生物,更有人认为“黑胶虫”是血清的原虫,或误以为是细菌或真菌污染。但科学家通过进一步的研究发现它们更可能是血清中的蛋白结晶。这种结晶可能为蛋白析出,如纤维蛋白原凝结成纤维蛋白;或是盐析出,如磷酸钙等;也有一些是胆固醇和脂肪酸。以下图片就证实了这一说法,如纤维蛋白和磷酸钙。
Q6.如何判断血清污染?
(1) 首先检查并判断外包装是否有破损,一般瓶身破损的血清发生污染的可能性极大;
(2) 将血清接种到血酯板上,培养后看是否有菌落形成;
(3) 可通过质量检测试剂盒检测结果判定,如支原体检测试剂盒等。血清污染主要包括细菌污染、真菌污染和支原体污染。在细胞培养时想要确定血清存在细菌污染,可尝试使用5-10倍浓度青链霉素双抗冲击培养24-48h;真菌污染的细胞无法抢救,应立即将细胞瓶进行高压灭菌处理,并彻底消毒培养箱;支原体污染可考虑更换早期代次细胞,或使用商品化支原体去除试剂。
Q7.细胞形态不正常、生长状态异常或增殖速率缓慢是否与血清有关?
细胞形态异常需要综合关注细胞代次、传代操作、培养基和血清等诸多因素。如传代次数过多或传代时间过晚都有可能影响细胞的生长状态。有些细胞对血清具有一定适应性,更换新批次血清时可能出现所含因子水平的差异而导致的细胞生长状态受到影响的现象,可以通过血清梯度替换或者增加细胞适应时间来解决此类问题。与此同时也要关注基础培养基和传代操作等方面是否存在一定问题。
Q8. 如何做血清的梯度替换?
当细胞培养实验需更换血清品牌时,做程序性梯度替换方案尤为重要,因为不同品牌的血清所含成分有所差异,血清更换会使细胞发生不适,从而出现细胞增殖缓慢或细胞状态不佳等情况。建议的梯度替换方法。下图为HyCyte®预筛选胎牛血清更改的示意图。
Q9. 培养基中添加血清和抗生素后可长期保存吗?
新鲜培养基中添加血清和抗生素后,建议在2周内使用完。
Q10. 血清的热灭活是必须的吗?
实验表明,经热灭活处理的血清对细胞生长可能仅有微小促进或完全没有任何作用,甚至通常因高温处理而损失掉血清中部分营养成分从而影响血清质量,造成细胞生长速率降低。热灭活过程中因局部温度过高、摇晃不均匀或灭活时间过长,都会造成血清品质下降,且经热灭活后的血清会增加发生蛋白沉淀概率。因此,若非必须血清不需要做热灭活,而少数对补体敏感的细胞实验,如某些免疫学实验或腺病毒包装等,可酌情对血清进行热灭活操作。
Q11. 血清热灭活应如何操作?
实验表明,经热灭活处理的血清对细胞生长可能仅有微小促进或完全没有任何作用,甚至通常因高温处理而损失掉血清中部分营养成分从而影响血清质量,造成细胞生长速率降低。热灭活过程中因局部温度过高、摇晃不均匀或灭活时间过长,都会造成血清品质下降,且经热灭活后的血清会增加发生蛋白沉淀概率。因此,若非必须血清不需要做热灭活,而少数对补体敏感的细胞实验,如某些免疫学实验或腺病毒包装等,可酌情对血清进行热灭活操作。
来源:“ 苏州海星生物GZH,作者~hycyte海星生物。
说明:文章、视频、图片等所有内容,仅用于学习交流,若有侵权内容及其他涉法内容,请及时联系删除或修改,特此声明。
池径话1384培养基作用培养基是干什么用的? -
家例柄18581149258 ______[答案] 培养基(Medium)是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料,一般都含有碳水化合物、含氮物质、无... 含有丰富的细胞生长必须的营养成份,具有极为重要的功能.牛血清分为小牛血清、新牛血清、胎牛血清.胎牛血清应取自剖腹...
池径话13841640培养基的配制 如何确定小牛血清的量 -
家例柄18581149258 ______ 1640的培养基的配置我们是这样的. 500ml1640培养基中加入以下的物质. 5ml P/S(双抗)至终浓度1% 5ml NEAA(非必需氨基酸)至终浓度1% 5ml SP(丙酮酸钠)至终浓度1% 50ml 胎牛血清(我们用的是这个,至于你们是小牛还是胎牛看你们要培养的细胞的要求)至终浓度10% 胎牛血清的含量,也要看你的细胞要求,具体加多少你可以去ATCC上去查,上面会写明培养条件,不过一般是10%,偶然有一些细胞5%也行! 《复旦生命学院》为您解答,望采纳,呵呵,欢迎追问
池径话1384SERUM是什么? -
家例柄18581149258 ______ 语法标注解释 serum英音:['siərəm]美音:['sɪrəm] 以下结果由译典通提供词典解释 名词 n. 1.【生化】浆液;血清[U] 2.【植】树液[U] 3.乳清[U] 4.【生化】【医】免疫血清[U][C] anti-snakebite serum 治蛇咬伤的免疫血清 简介 中文...
池径话1384动物细胞培养为什么要填加血清? -
家例柄18581149258 ______ 血清含有动物细胞生长所需的营养成分,但血清里还有人类现在不掌握的物质,所以不能人工添加,只能用动物血清.你仔细看书就会发现,加与不加动物血清的培养基名称绝对不同,即使其他成分完全相同
池径话1384如何选择合适的细胞培养基和血清 -
家例柄18581149258 ______ 培养基的选择:细胞培养是实验室里最常见和最基本的实验了,但却不是最简单的.别小看细胞培养,这里可蕴含着大学问.有时候细胞状态不好,转染、药筛这些实验根本就没办法做.影响细胞培养的因素很多,让我们先从培养基和血清说起...
池径话1384人打了牛的血清有没有什么 -
家例柄18581149258 ______ 小牛血清与人血清离体的血液凝固之后,经血凝块聚缩释出的液体,即血清.血清可以抗病毒,增强抵抗力血清属于生物制剂 .小牛血清含在离开母体后自身产生的一些代谢物质,当然也包括一些生长激素,而胎牛血清绝大部分的物质来自于母...
池径话1384怎么样才能培养自己的浪漫细胞? -
家例柄18581149258 ______ 动物细胞中的高营养需求的培养,通常需要多种氨基酸,维生素,辅酶,核酸,嘌呤,嘧啶,激素和生长因子,其中许多成分行血清,胚胎浸出液来提供,在许多情况下,需要10%胎牛血清或新生小牛.血清是一个很好的营养物质,对细胞的含...
池径话1384弓形虫免疫学检测方法是什么?
家例柄18581149258 ______ 弓形虫免疫学检测方法是:(1)染色试验(DT).DT是弓形虫病特有的血清学检测方法,具有良好的特异 性、敏感性和重复性.主要用于急性弓形虫病和早期弓形虫感...
池径话1384fetal bovine serum是什么意思 -
家例柄18581149258 ______ fetal bovine serum 英 [ˈfi:tl ˈbəʊˌvaɪn ˈsɪərəm] 美 [ˈfitl: ˈboˌvaɪn ˈsɪrəm] [医]胎牛血清 网 络 胎牛血清; 胚牛血清 双语例句1. The fetal bovine serum ( FBS ) has been widely used in biomedical research. 胎牛血清在生物医学研...
池径话1384小牛气喘时为什么? -
家例柄18581149258 ______ 可能是由于环境因素引起的,胸膜肺炎,这是一个长期慢性病,如果治疗不及时会危急生命