荧光rt-pcr检测方法

何易俊2036列举两种研究基因表达模式的方法并简述其原理 -
裴股闵15899763509 ______ 1、经典的半定量RT-PCR和实时荧光定量RT-PCR.提取总RNA,通过光度计和电泳法检测质量并定量,采用反转录试剂盒进行反转录.对于半定量RT-PCR,采用内标基因(如25SRNA)引物对各样品进行普通PCR扩增和电泳,证明反转录成...

何易俊2036逆转录PCR和实时PCR -
裴股闵15899763509 ______ 逆转录PCR,或者称反转录PCR(reverse transcription-PCR, RT-PCR),是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形.在RT-PCR中,一条RNA链被逆转录成为互补DNA,再以此为模板通过PCR进行DNA扩增. 由一条RNA单链转录为互补...

何易俊2036RNA提取和定量测定的原理和方法 -
裴股闵15899763509 ______ 动物细胞的RNA提取一般使用Trizol,你可以到网上找它的使用说明 测定的方法的话可以有: 紫外分光光度计:通过测定OD260、280和230来检测RNA是否被杂质污染 琼脂糖凝胶电泳:检测RNA是否发生降解 RT-PCR:将其反转录成cDNA,通过荧光定量PCR检测各mRNA的表达量

何易俊2036怎样检测pcr板封膜后孔与孔之间没有相互污染 -
裴股闵15899763509 ______ 目测是最基本的,首先要保证孔与孔之间没有明显的液滴,或是液滴干掉留下的印记.如果在封口膜和板之间已经能看到液体(不在PCR管里面的),就说明已经有样品溢出,可能已经污染了.其他的方法就只有通过PCR来进行验证了,看看不同的孔之间有没有相互干扰的情况,因为通常情况下,如果溢出不太严重,通常是周围几个孔发生污染,而不会是全部孔都污染的.

何易俊2036谁能帮我问清RT - PCR,Real time - PCR和Real time RT - PCR? -
裴股闵15899763509 ______ Real-time PCR中文译作“实时聚合酶链反应”,是一种最新发展的定量PCR技术.该技术借助于荧光信号来检测PCR产物,一方面提高了灵敏度,另一方面还可以做到PCR每循环一次就收集一个数据,建立实时扩增曲线,准确地确定CT值,...

何易俊2036real - time pcr 的ntc是用什么替代 -
裴股闵15899763509 ______ NTC就是空白对照,不加样品,只加反应体系.

何易俊2036基因检测有哪些方法 -
裴股闵15899763509 ______ 检测基因表达的方法: 转录水平检测:RT-PCR,real-time PCR,northern blot 翻译水平检测:western blot 还有直接检测,如报告基因、融合荧光蛋白等.

何易俊2036什么是竞争定量PCR -
裴股闵15899763509 ______ 荧光定量pcr和半定量rt-pcr都可以用来检测基因的表达量的,但二者检测的东西多少有些不同.荧光定量pcr是在pcr反应体系中加入可以和双链dna特异性结合的荧光染料(sybr green)或者和目的dna片段结合的荧光探针(taqman),通过监控...

何易俊2036在real - time PCR中如何检测DNA污染 -
裴股闵15899763509 ______ 既然把DNA叫做污染,那应该是对RNA反转录后进行Real-time了. 你用未进行反转录的RNA作为模板,跑一次检测Real-time.如果没有DNA污染,这次RT是不会得到扩增结果的,因为RNA不能作为普通Taq酶的模板;一旦RNA样品里面有DNA污染,那检测RT出现扩增产物的可能性非常高. 只要RNA作为模板的Real-time PCR得到了扩增结果,那就是存在DNA污染. PCR产物的融解曲线必须做,而且你也必须得知道这对引物二聚体的融解峰,防止引物二聚体误导结果.