菌落pcr的注意事项

曲吴泡990影响pcr反应成败的因素有哪些 -
颜帘怜13774058673 ______ PCR需要注意以下事项:1.模板尽量避免含有酶抑制剂!2.引物保存时间不易过长,要符合引物涉及的原则,在用软件设计结束后要进行适当的人工处理.引物浓度要合适,太高容易引起错配及非特异性产物的形成.3.循环参数一般退火温度应低于Tm值5℃.先循环数次,然后延伸几分钟,再进行循环,有时候可以加大产物的量4.酶浓度过高容易导致非特异性产物的形成5.离子浓度过高容易导致非特异性产物的增加6.dNTP浓度过高会抑制酶的活性,引起错配希望对你有所帮助^_^

曲吴泡990什么是菌液pcr? -
颜帘怜13774058673 ______[答案] 用菌液行PCR还有一个小窍门,省很多事,就是你在挑菌落进行培养时准备1.5ML的EP管,每个管中加入1ML培养基,用接种针挑取菌落接种于EP管中,摇菌几个小时,摇动EP管观察,如果发现有混浊即可用来PCR.我从一开始就用这一方法,非...

曲吴泡990实时荧光定量PCR注意事项 -
颜帘怜13774058673 ______[答案] 1.按照正确的开关机顺序操作,有助于延长仪器的使用寿命,减少仪器出故障的频率.开机顺序:先开电脑,待电脑完全启动后再开启定量PCR仪主机,等主机面板上的绿灯亮后即可打开定量PCR的收集软件,进行实验.关机顺序:确认实验已经结束...

曲吴泡990我想问做PCR扩增应该注意的事项? -
颜帘怜13774058673 ______[答案] 注意] 1、整个操作要带口罩及一次性手套,并尽可能在低温下操作. 另外,提取上清这步一定要小心,靠近沉淀的部分一定要舍得不要,要不然会有蛋白质污染,影响比值 2、加氯仿前的匀浆液可在-70℃保存一个月以上,RNA沉淀在70%乙醇中可在...

曲吴泡990融合PCR的操作原理及注意事项 -
颜帘怜13774058673 ______ PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物. 实验操作注意事项 1、戴一次性手套,若不小心溅上反应液,立即更换手套. 2、使用一次性吸头,严禁与PCR产物分析室的吸头混用,吸...

曲吴泡990菌落pcr检测阳性转化菌时为什么会出现假阳性 -
颜帘怜13774058673 ______[答案] 因为你选择的引物不太合适,最好用一个载体上的通用引物加一条目的基因的特异引物做菌落PCR,这样会大大降低假阳性;如果你用目的基因本身引物做菌落PCR,挑菌时一定要小心不要沾到培养基(里面有大量的未连接的片段),然后PCR扩...

曲吴泡990菌落pcr挑菌时挑入培养基如有什么影响 -
颜帘怜13774058673 ______ 可能影响buffer的离子浓度,间接影响酶活.另外培养基表面也可能对酶活有直接影响.不过如果只挑入很小一块,影响不太大,毕竟很小的菌落中含有模版(一般是质粒)量都会很高,扩增比较容易.

曲吴泡990菌液PCR可靠吗
颜帘怜13774058673 ______ 不知道您做菌液PCR的目的是什么.如果是鉴定构建好的克隆或者亚克隆,那么菌液PCR就完全没有问题.PCR体系也可以小一些,只要注意,菌液的量一定不能过多,一般10ul的PCR体系中,加入过夜培养的菌液0.5ul就可以了.或者不用那...

曲吴泡990降落PCR的注意事项 -
颜帘怜13774058673 ______ 由于目标是在较早的循环中避免低Tm值配对,在TD—PCR中最好应用热启动技术.设计时,退火温度的范围应跨越15℃左右,从高于估计Tm值至少几度到低于它10℃.例:一对没有简并的引物—模板的计算Tm值为62℃.则:从65℃—>50℃(每2cycles降退火温度1℃),再在50℃退火温度下做15个循环.实验中如持续出现假象带(杂带),则是因为起始退火温度太低,或目的扩增产物和非目的产物的Tm值相差无几,或非目的扩增物以更高的扩增效率扩增,可把退火温度每降低1℃所需的循环数增加到3或4.

曲吴泡990PCR扩增DNA的注意事项是什么? -
颜帘怜13774058673 ______ 一、温度循环参数(老师会给你设定好) 二、引物引物设计(老师会给你设定好),三、退火步骤的严格性:提高退火温度可以减少不匹配的杂交,从而提高特异性.②减短退火时间及延伸时间可以减少错误引发及错误延伸.