蛋白质测定bca法

蛋白定量测定是实验生物学中一种常用的技术，用于测量样品中蛋白质的浓度或总量。这种测定对于生物化学、分子生物学、医学研究等领域非常重要。

图1. 定量蛋白组分析

一、蛋白定量的基本流程包括：

样品制备：细胞提取物、组织样品、血清、血浆、尿液或其他包含蛋白质的生物样品。确保样品是干净的，没有杂质。
选择测定方法：选择适合你的实验需求的蛋白定量方法。
制备标准曲线：制备一系列已知浓度的标准样品，需要标准曲线来测定蛋白质浓度。
测定样品：将样品与测定方法中的试剂混合，按照方法要求的步骤进行反应。根据反应产物的颜色、吸光度或其他特性，使用分光光度计或其他相关仪器测量并记录结果。
计算蛋白质浓度：根据标准曲线或测定方法的公式，计算出样品中的蛋白质浓度。

二、蛋白定量的常见方法包括：

1、Bradford 蛋白质测定法：

原理：这种方法基于柯马斯亮蓝G-250染料与蛋白质结合时所发生的颜色变化。
优点：操作简单，灵敏度较高。
缺点：受到洗涤剂和其他化学物质的干扰。

2、Lowry 法：

原理：基于铜离子在碱性条件下与蛋白质中的多肽键结合，并进一步与Folin-Ciocalteu试剂反应产生颜色变化。
优点：适用于较低浓度的蛋白质。
缺点：步骤比Bradford法更复杂，且易受其他物质的干扰。

3、BCA法（双缩脲酸法）：

原理：与Lowry 法类似，但使用BCA试剂，对铜离子和蛋白质反应更为敏感。
优点：适用于微量蛋白质的测定，稳定性好。
缺点：需要较长的孵育时间。

4、紫外吸收光谱法：

原理：蛋白质中的色氨酸和酪氨酸在紫外光下有特定的吸收峰。
优点：快速且不需要添加任何试剂。
缺点：对其他物质的吸收干扰敏感，需要较纯净的样品。

5、基于质谱技术的蛋白定量

1）无标记定量

原理：不使用化学标签，直接通过分析肽段离子的强度或计数来定量蛋白质。
优点：操作简化，适用于广泛的样品类型，无需额外的化学修饰。
缺点：对样品制备和质谱操作的质量要求高，数据处理和解释较为复杂。

2）iTRAQ/TMT

原理：使用特殊的化学标签对样品中的蛋白质进行标记。在质谱中，标记产生特定的裂解离子，用于定量分析。
优点：可以同时分析多个样本，提高了实验的吞吐量。
缺点：高成本，数据处理复杂，对实验设计和执行有较高要求。

3）同位素编码亲和标记（ICAT）

原理：使用含有不同同位素的化学标签对蛋白质或肽段进行标记，然后利用质谱分析比较不同样本中蛋白质的相对丰度。
优点：提供了准确的蛋白质相对量比较，可用于复杂样品。
缺点：成本较高，操作复杂，可能无法检测未标记的蛋白质。

4）SWATH-MS

原理：基于数据独立采集，通过系统地扫描所有预定质量窗口来收集质谱数据。
优点：提供高通量、高重复性的定量信息，适合复杂样品分析。
缺点：需要高级的数据处理技术，对仪器性能要求高。

5）多重反应监测（MRM）

原理：选择特定的前体离子和产物离子对，用于定量特定肽段或蛋白质。
优点：高度特异性，灵敏度高，适合低丰度目标蛋白的定量。
缺点：每次只能定量有限数量的目标蛋白，需要事先知道目标蛋白的信息。

荆朋友1830蛋白质印迹目的蛋白质量测定最近在做western blot 的实验,做完之后用BCA法测定了蛋白质的浓度,但是怎么能够知道目的蛋白的质量啊?用什么方法进行... -
冷货昭17061691682 ______[答案] BCA检测的是所有蛋白的量. 你想要测定目的蛋白的量,最好用ELISA检测,这样更容易些 非要用Western Blot来定量,需要一种软件的. 然后Marker来检测的是分子量,不是浓度.

荆朋友1830蛋白质海量测定 -
冷货昭17061691682 ______ BCA法的原理是通过测被蛋白质易氧化成分(巯基,酚基)还原的一价铜离子,而间接得出蛋白质量.你得出的结果0.7mg/ml和0.3 mg/ml,可能BCA测量结果大于真实值.(蛋白质中有其它杂质,且是易氧化成分)

荆朋友1830测定蛋白质含量的方法 缺点 -
冷货昭17061691682 ______[答案] ①凯氏定氮法 原理:蛋白质平均含氮量为16%.当样品与浓硫酸共热,蛋白氮转化为铵盐,在强碱性条件下将氨蒸出,用加有指示剂的硼酸吸收,最后用标准酸滴定硼酸,通过标准酸的用量即可求出蛋白质中的含氮量和蛋白质含量. ②双缩脲法 原...

荆朋友1830蛋白质浓度测定方法有哪些?
冷货昭17061691682 ______ 目前常用的有四种古老的经典方法,即定氮法,双缩尿法(Biuret法)、Folin-酚试剂法(Lowry法)和紫外吸收法.另外还有一种近十年才普遍使用起来的新的测定法,即考马斯亮蓝法(Bradford法); 还有近来广为应用的蛋白定量方法——BCA法.其中Bradford法和Lowry法灵敏度较高,比紫外吸收法灵敏10~20倍,比Biuret法灵敏100倍以上.定氮法虽然比较复杂,但较准确,往往以定氮法测定的蛋白质作为其他方法的标准蛋白质.

荆朋友1830蛋白质含量测定药典规定必须用什么方法 -
冷货昭17061691682 ______ 蛋白质含量测定根据我国药典的规定,不同品种应针对自身蛋白质特性选择适宜的测定方法并做相应方法学验证,同时应尽可能选用与待测品种蛋白质结构相同或相近的蛋白质作对照品. 第一法 凯氏定氮法 第二法 福林酚法(lowry) 第三法 双缩脲法 第四法 联喹啉-二羧酸法(BCA) 第五法 考马斯亮蓝法(Bradford) 第六法 紫外分光光度法

荆朋友1830BCA法、凯氏定氮法、Brarford法、甲醛滴定法中哪个方法测多肽含量比较好?
冷货昭17061691682 ______ Bicinchoninic acid (BCA )法是近来广为应用的蛋白定量方法.其原理与Lowery法蛋白定量相似,即在碱性环境下蛋白质与Cu2+络合并将Cu2+还原成Cu1+.BCA与Cu1+结合形成稳定的紫蓝色复合物,在562 nM处有高的光吸收值并与蛋白质浓...

荆朋友1830利用蛋白质的呈色反应来测定蛋白质含量的方法有哪些 -
冷货昭17061691682 ______ 双缩脲法(Biuret法)、考马斯亮兰法(Bradford法)、BCA比色法

荆朋友1830如何测定蛋白浓度 -
冷货昭17061691682 ______ 用蛋白定量试剂盒,常用的有Brafford法,BCA法.

荆朋友1830蛋白质含量的测定都有哪几种方法,适用情况以及优缺点 -
冷货昭17061691682 ______ ①凯氏定氮法 原理:蛋白质平均含氮量为16%.当样品与浓硫酸共热,蛋白氮转化为铵盐,在强碱性条件下将氨蒸出,用加有指示剂的硼酸吸收,最后用标准酸滴定硼酸,通过标准酸的用量即可求出蛋白质中的含氮量和蛋白质含量. ②双缩脲...

荆朋友1830如何检测蛋白质含量 -
冷货昭17061691682 ______ BCA蛋白定量~先绘制标准曲线~