质粒碱裂解

须谭养3883在碱裂解法提取质粒DNA实验中,RNA酶可以不加入Ⅰ液,而在最后加入质粒溶液吗?如何获得更多的超螺旋质粒? -
羿才韩13794589098 ______[答案] 若无特殊考虑,Rnase加入到Buffer 1,并低温保存是最好的.在最终收获的质粒中加入,会带来RNAase的污染,并会有寡核苷酸的带入,并可能降低你质粒的得率,你需要考虑是否对你后续实验有影响(是否还要去RNAase?).另一种情...

须谭养3883质粒抽提的抽提方法 -
羿才韩13794589098 ______ 质粒抽提最常用的方法是碱裂解法,它具有得率高,适用面广,快速,纯度高等特点.关于碱裂解法的原理,复旦大学生化与分子生物学实验室的网站有一篇专论,大家可以去看一下.这是一篇美文,非常有趣.文中提到了一个与几乎所有能查...

须谭养3883RNA的提取方法步骤及原理. -
羿才韩13794589098 ______[答案] 分子克隆技术(华农) 实验一 质粒的制备 质粒是携带外源基因进入细菌中扩增或表达的主要载体,它在基因操作中具有重要作用.质粒的分离与提取是最常用、最基本的实验技术. 质粒的提取方法很多,大多包括3个主要步骤:细菌的培养、细菌...

须谭养3883质粒用碱裂解法提取过程中,加入溶液Ⅲ冰浴10分钟的目的是什么? -
羿才韩13794589098 ______[答案] 使蛋白凝固、好提取上清

须谭养3883质粒的提取原理 -
羿才韩13794589098 ______ 质粒提取是指去除 RNA,将质粒与细菌基因组 DNA分开,去除蛋白质及其它杂质,以得到相对纯净的质粒. 目录 一、质粒提取原理 质粒是细胞内的一种环状的小分子DNA,是进行DNA重组的常用载体.作为一个具有自身复制起点的复制单位...

须谭养3883SDS碱裂解法质粒DNA小量提取最近在做质粒DNA的提取,做到最后,加入TE还有不容的沉淀,请高手指导一二, -
羿才韩13794589098 ______[答案] 不知道你是手提还是试剂盒提质粒,试剂盒我没碰到过这样的状况,如果是手提,一般考虑蛋白没有除干净,如果电泳质粒没有问题,不用去管,如果后续实验对质粒要求较高,可以考虑再次除蛋白,但是质粒也会损失,或者重提质粒时,将除蛋白...

须谭养3883震荡能使质粒破坏吗
羿才韩13794589098 ______ 一般机械振动是很难破坏质粒的.在离心机中一万两千转的速度都不能破坏质粒.一般的超声波清洗机也做不到.要用专门的超声波细胞破碎仪才可以将DNA打碎. 如果你讲的是采用碱裂解法裂解细胞提取质粒DNA,加入试剂以后要柔和混匀,不要剧烈震荡,不是因为单纯的机械震荡会使质粒破坏,而是因为碱裂解法加了化学试剂,它能够破坏质粒,为避免造成所提质粒中出现基因组DNA污染,不能用力摇动. 你如果不加任何试剂,随你怎么摇也不会破坏质粒.

须谭养3883质粒提取的步骤 -
羿才韩13794589098 ______ 实验一 ApaLI (178) P(BLA) ALPHA 质粒DNA的提取、 质粒DNA的提取、酶切 DNA的提取 及琼脂糖凝胶电泳 ApaLI (2367) EcoRI (397) AvaI (413)XmaI (413) SmaI (415) APr pUC19 BamHI (418) PstI (440)HindIII (448) P(LAC) ORI 2686 bp ApaLI ...

须谭养3883提取质粒时这样去除基因组总DNA -
羿才韩13794589098 ______ 用碱裂解法提质粒,基因组DNA会与细胞残骸聚集,而小的质粒DNA溶在水相中,通过离心就能除去;如果还担心有少量基因组DNA污染,可以电泳后从胶中回收质粒片段;用核酸外切酶也能消化掉线性的DNA,而环形和超螺旋的质粒DNA则得以保留.