质粒dna提取试剂盒

柱式质粒提取试剂盒

产品简介：

采用优化的 SDS-碱裂解法裂解细胞，高效去除抑制物等杂质，离心吸附柱内的硅基质膜在

高盐、低 pH 值状态下选择性地结合溶液中的质粒 DNA，并最大限度的去除蛋白质、基因

组 DNA、RNA 和其他杂质，最后在低盐、高 pH 的洗脱缓冲液将纯净质粒 DNA 从硅基质

膜上洗脱，每个吸附柱可吸附高达 50μg 的质粒 DNA。纯化的质粒 DNA 可直接用于酶切、

PCR、测序、转化、转染一些常规的传代细胞等生物学实验。

产品内容：

储存条件：

RNase A，-30 ~ -15℃保存，干冰运输；

其他组分 15 ~ 25℃保存，室温运输。

使用步骤：

1、取 5-15 mL 过夜培养菌液加入离心管中，12000 rpm 离心 1 min 收集菌体沉淀，尽量吸弃

上清。

2、向留有菌体沉淀的离心管中加入 500 μL Buffer P1（已加入 RNase A），使用移液枪或涡

旋振荡器充分混匀，悬浮菌体沉淀，混匀至无菌块。

3、向离心管中加入 500 μL Buffer P2，温和上下颠倒混匀 4-6 次，充分混匀使菌体裂解，此

时溶液应变得清亮粘稠。

注意：温和地混匀，不要剧烈震荡，以免打断基因组 DNA。所用时间不应超过 5 min，以免质粒受到破坏。

4、向离心管中加入 700 μL Buffer P3，立即温和上下颠倒混匀 8-10 次，充分混匀，此时应出现白色絮状沉淀，12000 rpm 离心 10 min。

注意：P3 加入后立即混合，避免产生局部沉淀。如果离心完仍有沉淀漂浮，可延长离心时间取上清。

5、将步骤 4 中的上清液分批转移到已装入收集管的吸附柱中，12000 rpm 离心 1 min，倒掉

收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

注意：一根吸附柱最大容积为 750 uL，请分两次转移上清液到吸附柱中。

6、向吸附柱中加入 500 μL Buffer PD，12000 rpm 离心 1 min，弃废液。

7、向吸附柱中加入 600 μL Buffer PW（使用前请确认是否加入无水乙醇），12000 rpm 离心

1 min，弃废液。

注意：加入漂洗液 PW 后，室温静置 2-5 min，有助于更好的去除杂质。

8、重复一次步骤 7。

9、将吸附柱重新放回收集管中，12,000 rpm 离心 2 min，目的是去除吸附柱中残余的漂洗液。

注意：乙醇残留会抑制后续的酶反应，建议将吸附柱开盖，置于室温放置数分钟，确保乙醇挥发干净。

10、将吸附柱放到一个干净灭菌 1.5 mL 离心管中，将吸附柱开盖静置数分钟。向吸附膜中

间位置悬空滴加 50-100 µL Buffer TE 或 ddH2O（可提前放在 55 - 65 ℃水浴锅中预热，提高

质粒 DNA 回收率），室温放置 2 min。12,000 rpm ，离心 2 min 收集质粒 DNA 溶液（若需

要获得最高产量，建议将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，重复第 10 步进行二次洗脱。）。

11、质粒溶液保存在- 20℃。

注意事项：

1、使用前请短暂离心 RNase A，将试剂盒提供的 RNase A 溶液全部加入 Buffer P1 中，置于

4℃保存。

2、首次使用前按 Buffer PW 瓶子标签所示，加入适量的无水乙醇稀释 Buffer PW，于室温保

存。

3、若低温保存时，Buffer P2、Buffer P3 和 Buffer PD 溶液容易产生白色沉淀，使用前可室

温放置一段时间，必要时可在 37℃水浴锅中预热至沉淀完全溶解，混匀后再使用。

4、Buffer PD 可以有效去除残留的蛋白污染，当宿主菌为 endA+（TG1、BL21、HB101、ET12567、

JM 系列）等核酸酶含量较高的菌株时，必须使用 Buffer PD。

5、处理低拷贝质粒时，提高菌液的用量，并按比例扩大 Buffer P1、Buffer P2 和 Buffer P3

的用量。

6、使用 Buffer P2、Buffer P3 和 Buffer PD 应戴手套，使用后应立即盖紧盖子。

7、自备试剂：乙醇。

黄璐纯685质粒提取试剂盒与纯化试剂盒一样吗 -
禄彩琳17336283979 ______ 不一样哦,纯化试剂盒可以将RNA、蛋白、杂质等物质去除得更干净.

黄璐纯685我们院里要进质粒提取试剂盒?求助 -
禄彩琳17336283979 ______ 常规的使用小提试剂盒提取得到的质粒,并不适合用来转染细胞,其原因在于:1.小提质粒浓度较低,一般仅为0.1~0.2ug/ul.而用质粒转染细胞,一般至少需要2~5ug左右,如果使用小提质粒,只能加大上样量,这样对转染操作会有一定影响.2.小提质粒纯度不够,且内毒素含量较高,会对目的细胞有一定毒性,影响转染效率.基于以上原因,如果提取的质粒在用质粒转染目的细胞时,可以选择长沙赢润生物技术有限公司的质粒大量提取试剂盒.

黄璐纯685跪求!!博凌科为 的 无内毒素质粒大提试剂盒 的详细说明!谢谢!!!
禄彩琳17336283979 ______ 博凌科为的无内毒素质粒大提试剂盒,轻松从大量菌液中最大限度获得转染级质粒 本试剂盒采用独特硅胶膜吸附技术,高效专一地结合质粒DNA.同时采用特殊的去内毒素系统,可有效的去除内毒素、蛋白等杂质,操作简单方便,可同时操作...

黄璐纯685用小剂量质粒提取试剂盒提取质粒前要做什么工作?
禄彩琳17336283979 ______ 各公司的质粒提取试剂盒大同小异,你这个说明书可能是宝生物的试剂盒. 用试剂盒提,准备工作都比较简单: 1,摇菌; 2,准备ddH2O,无菌枪头和离心管; 3,检查溶液1是否加了Rnase,以及wash buffer是否加了无水乙醇; 3,现在天气冷,检查buffer是否有沉淀,有sds的buffer可能有会有析出,提前开水浴锅,温浴,此外,最后一步加TE或水洗脱质粒时,为提高收获量,在离心前,将柱子在50℃水浴2min更好. 若有疑问,欢迎继续讨论,纯属手打,欢迎采纳,祝实验顺利!

黄璐纯685Axygen公司的质粒DNA小提试剂盒从1 - 4mL菌液中一般能提取几ug的质粒? -
禄彩琳17336283979 ______ 1-2ug左右吧 如果拷贝数低的质粒也可能不到1ug 4ml的话

黄璐纯685碱法提取质粒中,基因组dna和蛋白质怎样被去除,其原理何在 -
禄彩琳17336283979 ______ 现质粒提取论手提试剂盒其根本原理碱裂解:菌体NaOH SDS溶液裂解蛋白质与DNA发变性加入液质粒DNA能够迅速复性呈溶解状态离留清;蛋白质与染色体DNA变性 呈絮状离沉淀 进步质粒DNA获取手提经苯酚、氯仿抽提RNA酶消化乙醇沉淀 等简单步骤除残余蛋白质RNA及盐试剂盒则基础使用DNA吸附柱吸附质粒DNA洗脱质粒 评价:一通琼脂糖电泳检查所获质粒(准确需酶切)细菌基组DNARNA污染及质粒断裂少同根据marke量品进行致浓度定量; 二通紫外光光度计测定品OD二吧0OD二陆0计算其比值衡量品纯度经验值:纯DNA:OD二陆0/OD二吧0≈一.吧(>一.9,表明RNA污染;

黄璐纯685博凌科为的无内毒素质粒小提中量提取试剂盒好么?
禄彩琳17336283979 ______ 博凌科为的无内毒素高纯质粒小量快速提取试剂盒(离心柱型):测序专用,SUNBIOTECH质粒KIT,得率高纯度极佳测序专用,22万测序样品跟踪统计,测序成功率高于国产KIT 12%,长度长100—300bp进口膜,是您测序的最佳选择.特点:...

黄璐纯685提取质粒时这样去除基因组总DNA -
禄彩琳17336283979 ______ 用碱裂解法提质粒,基因组DNA会与细胞残骸聚集,而小的质粒DNA溶在水相中,通过离心就能除去;如果还担心有少量基因组DNA污染,可以电泳后从胶中回收质粒片段;用核酸外切酶也能消化掉线性的DNA,而环形和超螺旋的质粒DNA则得以保留.

黄璐纯685SDS碱裂解法质粒DNA小量提取最近在做质粒DNA的提取,做到最后,加入TE还有不容的沉淀,请高手指导一二, -
禄彩琳17336283979 ______[答案] 不知道你是手提还是试剂盒提质粒,试剂盒我没碰到过这样的状况,如果是手提,一般考虑蛋白没有除干净,如果电泳质粒没有问题,不用去管,如果后续实验对质粒要求较高,可以考虑再次除蛋白,但是质粒也会损失,或者重提质粒时,将除蛋白...