超净台的正确使用步骤

​人前列腺癌细胞LNCaP Clone FGC，是1977年从一位50岁白人男性（血型B+）的左锁骨淋巴结针刺活检中分离的，当时该患者已确诊为转移性前列腺癌。根据报道，该细胞对5-α-二氢睾酮（生长调节并生成酸性磷酸酶ACP）有响应。

那如何养好LNCaP Clone FGC 呢？小普今天来为你们详细讲解。

培养注意事项

01 该细胞并不形成一致的单层，而是形成集落；

02 该细胞会使培养基快速变酸，且生长缓慢，故传代后 48 小时内不应扰动；

03 普通TC处理的培养瓶或皿不能使细胞很好的贴壁，培养难度较高，需使用 Corning 的 cellbind 细胞培养瓶，或者使用多聚-L-赖氨酸溶液 包被过的培养皿；

04 在细胞运输途中，多数细胞会从培养瓶底分离，大片悬浮在培养基中，按照收货注意事项处理即可恢复正常。

收货处理方式

收货后，如果发现细胞漂浮或成团，可按下面的步骤进行处理：

01 将培养瓶内的所有培养基，转入无菌离心管，离心收集细胞（1200rpm 3min）；

02 去掉上清，用PBS重悬细胞，将细胞收集到一个离心管中，PBS震动离心管混匀即可，再次离心（1200rpm 3min）；

03 去掉上清，加入1ml左右0.25%胰酶，重悬混匀细胞。震动离心管，混匀即可，不能吹打。放入培养箱，消化细胞，消化时间3分钟左右；

04 消化完毕后，用移液枪轻轻吹打细胞悬液，使细胞团分散。加入5ml含血清的培养基，混匀后终止消化，离心（1200rpm 3min）；

05 去掉上清，加入5-7ml相应完全培养基混匀，轻轻/反复吹打细胞，接种于无菌T25瓶中（接种容器应提前用对应培养基浸润）。

传代步骤

01 吸出原培养液；

02 加入2ml左右PBS，轻轻晃动培养瓶，润洗细胞，吸出PBS，丢弃；

03 加入1ml左右胰酶，轻轻晃动培养瓶，使之浸润所有细胞；

04 放入培养箱消化，消化5分钟左右，显微镜下可看到，细胞块中间的细胞明显分离变圆，且自然脱落（全程不要拍打培养瓶）；

05 加入3ml含血清的培养基，终止消化，轻轻/反复吹打细胞，在显微镜下观察。细胞悬液中，细胞尽量为单个状态；

06 收集细胞悬液，离心（1200rpm 3min）。离心完，吸出上清，丢弃；

07 加入新鲜培养基，吹打几下，混匀细胞即可。按需接种到新培养瓶，补充足量培养基，拧松瓶盖，或使用透气瓶盖进行培养；

08 检查培养箱的二氧化碳、温度及水盘。

传代比例和频次

推荐1:2~1:4传代，每4~5天传代一次。

换液步骤

吸出旧培养基，沿培养瓶侧边加入新培养基；

每3天换液一次。

冻存步骤

01 配置冻存液。推荐配比：55%（基础培养基1640）+40%(血清)+5%（DMSO）；

02 DMSO配置时会放热，一定要等冻存液冷却后再使用，避免灼伤细胞；

03 细胞消化好后用新鲜培养基中止，制成细胞悬液；

04 1200rpm 3min 离心后去上清，尽量吸干净上清；

05 加入配置好的冻存液，重悬，建议一个T25长满冻存1支，或者细胞计数后，按照2-5×106cells/支的比例冻存；

06 将分装好的冻存液转入程序冻存盒，放入-80℃冰箱过夜；

07 从-80℃冰箱取出冻存管，迅速转移到液氮，长期保存。

复苏步骤

01 将水浴锅预热至37℃，准备好干净的一次性手套，向一个无菌离心管内，加入9ml无菌培养基；

02 将细胞从液氮罐中取出，放入一次性手套中，迅速没入水浴锅。摇晃冻存管加速溶解，以1分钟内全部溶解为宜；

03 在超净台中，将复苏好的细胞液，加入到装有新鲜培养基的离心管内，1200rpm/min离心3分钟，离心完毕，去掉上清；

04 用适量与细胞对应的完全培养基重悬细胞，接入到无菌容器（培养瓶或培养皿）中，补充一定量培养基，放入培养箱培养；

05 溶解过程要迅速，已溶解的冻存细胞不能在常温下存放太久，需尽快离心去除DMSO。

参考文献： [1].https://www.cellbank.org.cn/cellbank_upload/20191204161104_6905.pdf

来源：“武汉普诺赛”GZH，作者~小普。
说明：文章、视频、图片等所有内容，仅用于学习交流，若有侵权内容及其他涉法内容，请及时联系删除或修改，特此声明！

习狗广1205如何正确使用超净工作台
荣健炒18142947059 ______ 超净台进风口在背面或正面的下方,金属网罩内有一普通泡沫塑料片或无纺布,用以阻拦大颗粒尘埃,应常检查、拆洗,如发现泡沫塑料老化,要及时更换.除进风口以外,如有漏气孔隙,应当堵严,如贴胶布,塞棉花,贴胶水纸等.工作台正...

习狗广1205超净工作台操作要求和超净工作台使用方法有哪些方面
荣健炒18142947059 ______ 1 超净工作台操作要求 1.1 超净工作台必须在试车检查良好的情况下,方可使用.启动风机前必须对工作台和周围环境进行认真的清洁工作,并进行适当的灭菌处理. 1.2 ...

习狗广1205什么是超净工作台操作规程?
荣健炒18142947059 ______ 超净工作台操作规程如下:一是用紫外光灯(或臭氧灯)照射,将接种瓶(袋)和接种用具放人已 灭菌的接种室内,用5%石炭酸溶液或新洁尔灭溶液喷雾,再打开紫外光灯或臭氧灯20 -30分钟杀菌.二是开动机器,等机器正常运转20分钟后,操作区空气净化完成,再 行接种.三是工作人员穿无菌工作服和鞋,戴好口罩、帽子.四是接种用具放在台面两侧或下风侧,操作人员的手置于接种材料 的下风侧.五是工作时严禁搔头、快步走动、推拉口等发尘量大的动作.六是接种操作时,动作力求迅速、轻菇,尽量减少污染的机会.用过 的火柴杆、棉球、废物应放人容器内,不得丢在地上.是接种完毕,把东西搬出,将桌面收拾干净,用杀菌药液擦净台面 及地面.

习狗广1205超净工作台操作有何规程?
荣健炒18142947059 ______ 一是将接种瓶或接种袋和接种用具放入已灭菌的接种室内,打 开紫外线灯或臭氧灯20 ~ 30分钟杀菌.如果没有紫外线灯或臭氧 灯,也可用5%石炭酸溶液或新洁尔灭溶液喷雾.二是开动机器,等机器正常运转20分钟后,操作区的空气净化 完成,再进行接种.三是工作人员必须穿无菌工作服和鞋,戴口罩和帽子.四是将接种用具放在台面两侧或下风侧,操作人员的手置于接 种材料的下风侧.五是工作时,严禁搔头、快步走动和树立门等一些发尘量大的动作.六是接种操作时,动作力求迅速、轻巧,尽量减少污染的机会. 用过的火柴杆、棉球以及一些废物要放入容器内,不得丢在地上.七是接种完毕,把东西搬出,将桌面收拾干净,用杀菌药液擦 净台面及地面.

习狗广1205珠海洲上净化浅析使用超净工作台具体步骤是什么
荣健炒18142947059 ______ 使用超净工作台时,应提前50分钟开机,同时开启紫外杀菌灯,处置操纵区内外貌积聚的微生物,30分钟后封闭杀菌灯(此时日光灯即开启),启动风机. 对新安置的或...

习狗广1205洲上超净工作台的使用管理方法有哪些呢
荣健炒18142947059 ______ 超净工作台的使用管理方法有哪些呢?具体有以下几方面: (1)每次使用超净工作台时,实验人员应先开启超净工作台上的紫外灯,紫外照射20分钟后使用. (2)开启超净工作台工作电源,关闭紫外灯,并用75%的酒精或0.5%过氧乙酸喷洒擦拭消毒工作台面. (3)整个实验过程过程中,实验人员应按照无菌操作规程操作. (4)实验结束后,用消毒液擦拭工作台面,关闭工作电源,重新开启紫外灯照射15分钟. (5)如遇机组发生故障,应立即通知实验动物室,由专业人员检修合格后继续使用. (6)实验人员应注意保持室内整洁. (7)超净工作台的滤材每2年更换一次,并作好更换记录.

习狗广1205超净工作台操作使用前的准备工作具体有哪些?
荣健炒18142947059 ______ 超净工作台操作使用前的准备工作有哪些呢?如下介绍: (1)开启超净工作台风机,净化台内环境.打开工作灯达到工作照度. (2)检查超净工台中准备的各种灭菌饲养和实验物品是否齐全.若需更换笼盒.检查灭菌笼盒准备情况,并用不锈钢推车移至超净台移门边. (3)检查喷雾器喷洒效果及超净台内外擦抹用的药液是否已配置好. (4)打开房间内排风系统.排除打开笼盒时逸出的有味气体. (5)检查IVC机组各种表头指针及目视各笼盒内的动物情况,估测IVC运行情况. (6)记录影响实验动物繁殖、生长、发育的主要环境参数,如温度、相对湿度、日温差、笼盒内外压差等.

习狗广1205东莞洲上超净工作台操作使用程序规范有哪些呢
荣健炒18142947059 ______ 超净工作台操作使用程序规范有哪些呢?具体有如下几个方面: (1)人员带好一次性口罩、帽子及医用乳胶手套. (2)用双手轻轻抬起IVC笼盒外端,沿笼架搁挡向外移出笼盒,放在超净工作台旁的不锈钢小推车上. (3)用消毒液喷雾器充分喷洒双手手套外表及IVC笼盒的外面,消毒灭菌并沾粘住表面的尘埃,防止进入超净台时被层流气体吹扬.也可用带手套的双手浸入消毒液容器中,捞起并拧干毛巾,擦干手套外液滴,同时擦一下笼盒的外表. (4)打开超净工作台移门,把笼盒移入超净工作台. (5)适当拉下超净工作台移门.打开IVC笼盒盖底之间的紧固扣并打开笼盖.侧卧放在一边.

习狗广1205洁净工作台的操作程序有哪些?
荣健炒18142947059 ______ 1 目的:明确超净工作台的标准操作程序. 2 范围:超净工作台. 3 责任:生测检验员. 4 内容: 4.1 使用前,用菌检室专用抹布蘸0.1%的新洁尔灭擦拭工作台两遍. 4.2 打开工作台上的紫外灯,进行表面及空间消毒,30分钟后关闭. 4.3 打开工作台送风机20分钟,进行检验操作. 4.4 工作台内严禁存放不必要的物品,以保持净气流型不受干扰. 4.5 工作台区内应避免明显扰乱气流流型的动作. 4.6 操作结束后,用专用抹布及0.1%新洁尔灭擦拭工作台,关闭风机. 4.7 新安装或一周内未使用的工作台,工作前应对工作台及环境按菌检室清洁程序进行清洁. 4.8 工作台的使用环境温度应小于50℃.