载体连接不长菌的原因

扈马健2967双酶切连接后转化,长出了菌落,但提质粒跑电泳,分子量比目的质粒大很多,为什么
孔态悦18938296752 ______ 可能是两个载体互连了,你酶切了跑胶分析一下长度就清楚了. 原因基本跑不了载体互连、多个片段互连,或者根本没提出来,而是把细菌基因组给弄出来了,这样你就要检查一下提质粒的过程,仔细看一下胶上有没有条带什么的. 不着急,原因很多,逐个分析.

扈马健2967基因与载体高效重组连接需要的条件 -
孔态悦18938296752 ______ 1.如果是采用粘性末端连接法的话应该防止载体的自身环化,可以用细菌或小牛肠的碱性磷酸酶预先处理线性的载体DNA分子,去除线性载体DNA两端的5端磷酸基团,这样,在连接反应中,载体DNA的两个末端之间就无法被连接酶共价连接了.2.如果是采用的定向克隆法的话就不用考虑载体的自身环化.3.如果是平末端连接法,就要满足a.具有高浓度的T4DNA连接酶b.高浓度的平末端外援DNA连接和质粒DNAc.低浓度的ATPd.不存在亚精胺一类的多胺.

扈马健2967抗性基因或标记基因在质粒上的话,它怎么起到检验目的基因的作用? -
孔态悦18938296752 ______ 抗性基因或标记基因在质粒上是为了检验质粒是否被转入菌体中.如果你的质粒是已经构建好,而且鉴定正确的,没有空载体质粒,那么,当你转化后,在筛选平板上转化(因为转化不是100%的效率,有些菌是没有质粒转入的),只有转入了...

扈马健2967【求助】菌落PCR有目的条带与菌液PCR却什么都没有? -
孔态悦18938296752 ______ 高手们好.最近做酶切连接转化,最后做鉴定时,以菌落为模板进行PCR时可以见到有目的条带;当把菌落接种到LB液扩菌后,以菌液为模板进行PCR时却什么东东都没有?请问会是什么原因啊?多多指教啊!建议重新以菌落为模板进行PCR...

扈马健2967设计原核表达载体时,连不上是什么原因 -
孔态悦18938296752 ______ 构建一个新的基因表达载体,通常采用PCR将目的基因调出来.设计引物时从基因的CDS区开始(+1)为上游引物,下游为终止密码子止,再将目的基因转载到载体的MCS区

扈马健2967【求助】菌落PCR有目的条带与菌液PCR却什么都没有? -
孔态悦18938296752 ______[答案] 高手们好.最近做酶切连接转化,最后做鉴定时,以菌落为模板进行PCR时可以见到有目的条带;当把菌落接种到LB液扩菌后,以菌液为模板进行PCR时却什么东东都没有?请问会是什么原因啊?多多指教啊!建议重新以菌落为模板进行PCR检测,...

扈马健2967基因表达载体构建的原理和操作步骤转入基因的农杆菌算是基因表达载体吗? -
孔态悦18938296752 ______[答案] 先回答你的问题,转入外源基因的农杆菌不能较载体,它本身是外源基因的受体,携带外源基因的质粒或者噬菌体才是载体. 你想问基因表达载体的构建,这个问题太大,而且表达载体多种多样,用处也很多,所以很难一下子概况.我只能大概说一下...

扈马健2967求助高手!转化后菌液生长速度忙是什么原因?我现在在做原核表达方面
孔态悦18938296752 ______ 有可能是你要表达的基因产物对宿主菌有抑制作用,换个宿主菌株或换个表达载体试试.试管中有白色沉淀说明死菌存在,另外不加抗生素尝试一下,待菌生长旺盛后加入抗生素.

扈马健2967用同种限制酶切质粒和含有目的基因的DNA,用DNA连接酶连接后为什么不会出现载体 - 目的基因连接物这种产物? -
孔态悦18938296752 ______ 不是…一种是需要的产物,一种是切开以后又合上了,等于没切.还有一种是载体载体连接的,就是两个载体连在一起的特殊产物