酚氯仿异戊醇怎么配

毕空广4545...我自己觉得有两个原因:1.Tris饱和酚应该使用上层还是下层,还是混匀后使用?2.离心的转速或时间是否不合理?酚和氯仿异戊醇(25:24:1)是怎样配置... -
魏往盼17337665424 ______[答案] Tris饱和酚分上相(tris)和下相即有机相酚,这样保存可以避免酚的挥发以及防止酚类氧化成醌,抽提时取下层酚相.在吸取... 若吸到的是上层tris溶液,它会与我们的上清互溶. 不过一般都不会单独使用酚,而是将酚与氯仿异戊醇混合(25:24:1)取与...

毕空广4545DNA 提取的问题,大家帮忙啊! 只剩这么多分了,望见谅啦! -
魏往盼17337665424 ______ 对于第一个问题,我不知道你是用多大的体系.我们提植物基因组都是装在1.5的EP管里的,酚氯仿都是分别加到管里,从来不做预混,因此也不会出现你想多加异戊醇的问题了.事实上,我们都不用异戊醇这个消泡剂.至于巯基乙醇,我们都...

毕空广4545CTAB提取植物DNA中的问题 -
魏往盼17337665424 ______ Tris饱和酚分上相(tris)和下相即有机相酚,这样保存可以避免酚的挥发以及防止酚类氧化成醌,抽提时取下层酚相.在吸取的时候要将枪头插到水相以下的酚相.若吸到的是上层tris溶液,它会与我们的上清互溶. 不过一般都不会单独使用酚,而是将酚与氯仿异戊醇混合(25:24:1)取与上清等体积的混合液的下相作抽提用,一次不行可重复,然后再用氯仿异戊醇(24:1)抽提一次. 另外转速和时间,你的完全可行.

毕空广4545大麦颗粒dna提出,如何去除蛋白质 -
魏往盼17337665424 ______ 先用酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)抽提,这时候经常在样品中会有酚残留,所以之后再用氯仿:异戊醇(24:1)抽提,将酚抽干净,以免影响后续的实验.在抽提前还要在DNA样品中加入1/10体积的PH5.2的3M醋酸钠,增加盐浓度,以免DNA沉淀出来的量太少,都被抽走了.还有最好在抽提之前要把DNA样品的体积扩大,这样也可以减少抽提过程中DNA样品的损失. 酚要用Tris-饱和酚,如果不要求样品很纯,就只用氯仿:异戊醇(24:1)抽提就可以了

毕空广4545双链RNA提取方法以及每一步的原理是什么 -
魏往盼17337665424 ______ 真菌菌丝的总RNA的提取 RNA提取缓冲液(CTAB):2% CTAB(W/V),2% 聚乙烯吡咯烷酮PVP(W/V),100 mM Tris-HCl(pH8.0,DEPC处理的水配置),25mM EDTA, 0.5g/L 亚精胺Spermidine,2.0M NaCl,2%巯基乙醇(V/V,使用前加入).由于在...

毕空广4545在提取的RNA中加入DNase后如何灭活DNase
魏往盼17337665424 ______ 一般两种办法,首先是每50ul体系中加入2ul 0.5M的EDTA然后80度水浴2分钟.另外一种是将50ul体系稀释到100ul然后加入等体积酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)混匀后12000rpm室温离心5min转上清,然后再加入等体积氯仿:异戊醇(24:1),混匀后12000rpm室温离心5min,转上清.在上清中加入10ul 3M的醋酸钠和250ul冷乙醇,-70度放置20min.4度12000rpm离心10min,弃上清.70%冷乙醇洗涤1次,然后干燥.最后沉淀用RNase free 的水溶解.个人建议用第一种方法,第二种方法太耗时间而且RNA回收率也低.

毕空广4545,配饱和酚、氯仿、异丙醇混合溶液 -
魏往盼17337665424 ______ 没太看明白.饱和酚、氯仿、异丙醇混合溶液本身就会分层,配完后要放2小时左右澄清了才能用~~~(混浊时我也用过,也可以) 我记得我配的时候,就是酚取下层,把三种溶液混合,摇一摇,放4度几个小时后用 但是我记得我用的是Tris饱和酚, Tris平衡苯酚也称Tris平衡酚或Tris饱和酚(Tris balanced phenol或Tris saturated phenol),是添加了抗氧化剂8-羟基喹啉, Tris,pH8.0充分平衡的苯酚.呈黄色 不知道你的那个水饱和的苯是否可以~~~~

毕空广4545CTAB法中氯仿/异戊醇称作什么液? -
魏往盼17337665424 ______ 氯仿/异戊醇用来变性和沉淀蛋白质.可称为变性液.CTAB才是提取液.冰冻的异丙醇或乙醇是沉淀液.