酶切产物可以直接连接吗

夔辰是1435加入双酶切位点克隆出的rna可以直接用于连接pet系列载体吗 -
却柳迫17282168524 ______ pET系列载体是用于原核表达的双链DNA载体.必须用带有双酶切位点的引物扩增cDNA或基因组DNA(无内含子的基因),然后分别酶切片段和载体,再连接.RNA不能直接连接.

夔辰是1435为什么切割DNA和质粒要用同一种限制酶啊?不相同的粘性尾端不能结合吗? -
却柳迫17282168524 ______ 我先明确的回答楼主,不同粘性末端不能连接,但是连接不一定非要用同种酶的酶切结果.酶切之后,根据酶的性质,产生粘性末端或者平末端.粘性末端就是常见的双链末端序列不一样长的末端,平末端就是你说的“直切”,切后双链末端一...

夔辰是1435双酶切时,是直接用pcr产物就可以,还是需要 -
却柳迫17282168524 ______ 1、回收PCR产物: 在进行PCR扩增时候,给引物两端设计好酶切位点,一般说来,限制酶的 选择非常重要,尽量选择粘端酶切和 那些酶切效率高的限制酶,如BamHI,HindIII,提前看好各公司的双切酶所用公用的BUFFER,以及各酶在公用...

夔辰是1435是不是一般在用酶切目的基因使用两个酶直接获得DNA片段? -
却柳迫17282168524 ______ 这要根据你基因上的酶切位点决定,目的基因上如果有两个相同的酶切位点是可以用这种酶切的,再用这种酶切质粒载体(载体上要有这个酶切位点),然后连接.不过这样就不能保证连接的方向,对产物的表达会有影响.所谓双酶切是在目的基因的两端有两种不同的酶切,载体也是用这两种酶,这样可以保证基因的定向连接.这些主要都是构建载体时的设计,先查一下要使用的质粒图谱,决定酶切位点,设计目的基因的PCR引物.

夔辰是1435如何确保pcr产物以正确的方向克隆到表达载体中 (未翻译方向) -
却柳迫17282168524 ______ 完全确保的话,第一,做酶切的两个酶要不一样;二你在做完酶切后,用磷酸化酶处理下,纯化后再连接(这一不会降低连接效率,但会确保质粒不自连.按正确方向克隆

夔辰是1435如何把目的片段从构建好的载体中提取出来 -
却柳迫17282168524 ______ 有两种常用的方法.第一种是直接将PCR扩增的基因片段酶切,然后连接到酶切过的表达载体上.第二种是先把PCR产物连到过度载体上,再从过度载体抢切下目的基因,最后再连接到酶切过的表达载体上.

夔辰是1435目的片段与t载体连接 -
却柳迫17282168524 ______ 可以,但是不知道你所谓的暂停了几个小时是在什么条件下暂停的.一般来说连接效果会有所降低,但是,因为每个人用的连接温度不一样,应该不影响后续试验吧.

夔辰是1435pcr扩增目的片段可以不连接t载体吗 -
却柳迫17282168524 ______ 可以,酶切后直接连目的载体.这样做可以省时间,用t载体过渡有时候感觉比较稳妥.

夔辰是1435pcr产物酶切放置两个星期后还能用来连接转化吗 -
却柳迫17282168524 ______ 长期保存放在-20度就可以了,短期(1-2天)放4度冰箱就好.

夔辰是1435合成两条互补引物,退火后能直接连酶切的载体吗 -
却柳迫17282168524 ______ 可以,AFLP等实验就是这么做的