酶切后连接16+一般要多久

邴严陈1701酶切后形成 片段数? -
越蒲季19888386577 ______ 这类题目不难. 最关键的是,要正确找到该酶的酶切位点,即特定的碱基序列.如果,没有酶的酶切位点,那么这种酶就不能对DNA分子起作用. 如果,是环形DNA分子,有几个酶切位点,就会被切成几段. 如果,是线性DNA分子,N种酶去切(都有酶切位点),就会形成(N+1)个DNA片段. ——————————————————————————————————— 对楼上的更正: DNA分子中,碱基之间的键是氢键,不是共价键.断开氢键,根本不需要酶切. 酶切开的是,磷酸基团与脱氧核糖之间的3',5'-磷酸二酯键,而不是什么氢键. 本人,研究生阶段做的就是基因工程. 楼主,如果还有什么不明白的地方,欢迎随时来问.

邴严陈1701pET28a双酶切后连接目的基因,什么也不长 -
越蒲季19888386577 ______ pET28a双酶切后连接目的基因什么也不长可以考虑对DNA进行定量.一般来说,设计一个连接反应,载体量最少需要50~100ng,而外源片段的分子数是载体分子数的3~10倍(具体质量取决于你的载体或外源片段的大小).连接体系为10ul,转化时用一半(5ul)转化50ul感受态细胞(最好用购买的感受态细胞,感受态的效率有保证),留下另一半备用.最好设置各种对照,以方便分析失败的原因,包括空载体连接对照等.

邴严陈170120ul双酶切体系和10ul双酶切体系的区别 -
越蒲季19888386577 ______ 20ul双酶切体系和10ul双酶切体系的区别:DNA的量是3.5微升 1、产物浓度不同 20ul双酶切体系比10ul双酶切体系产物的浓度高. 2、DNA反应量不同 20ul双酶切体系所含DNA要比10ul双酶切体系含有的DNA多,进行双酶切时所要切的DNA量也...

邴严陈1701双酶切连接转化反应谁了解
越蒲季19888386577 ______ 1、回收PCR产物:在进行PCR扩增时候,给引物两端设计好酶切位点,一般说来,限制酶的 选择非常重要,尽量选择粘端酶切和 那些酶切效率高的限制酶,如BamHI,HindIII,提前看好各公司的双切酶所用公用的BUFFER,以及各酶在公用...

邴严陈1701DNA酶切后电泳,条带呈复带的原因 -
越蒲季19888386577 ______ 你酶切的DNA是什么?质粒的话,双酶切中间有几十bp以上,切出来的条带就是两条,这个你应该能判断的.如果是pcr产物酶切出现了两条极近的带,那么很有可能是因为pcr产物纯化时有杂带污染,一开始跑胶的时候看不出来,后来你回收浓缩再加上酶切,再跑电泳的时候就出现了两条极近的带.其实将这两条带回收(上面那条是目的条带的可能性要大些),进行连接,只要操作和实验条件好的话,菌落的阳性率也挺高的,因为是双酶切连接.

邴严陈1701高中生物 - 基因工程 -
越蒲季19888386577 ______ 我们正好做过双酶切,呵呵 是这样的,因为我们需要在切下来之后做连接,不能保持它一直都是一个“切口”的状态,如果载体你只切一个口,目的基因也切这么个口,那么连接的时候就混乱了,可能自身闭合,也可能连成长串 但是如果载体切两个不同的口,目的基因也切这么两个口,那么连接的时候就可以1对1的把目的基因和载体给连上来 同一目的基因不同酶切下来的时候,其实两端带了一些无关的碱基的(也可以理解成冗余部分,专门拿来切的...呵呵) 条件的话,就是两种酶的切点不能太近,至少要隔10来个碱基,实验起来双酶切可以同时做的(如果可以用同样的缓冲液),不然反复的酶切/跑胶/回收会让dna的含量降到无法继续实验……

邴严陈1701单酶切连接的问题? -
越蒲季19888386577 ______ 1确认连接体系没有问题.2 确认设计引物的时候两边酶切位点的碱基和保护碱基没有问题.3 考虑PCR产物回收产物浓度提高一点.连T一般很容易的,我也做的单酶切连接,祝成功啦.

邴严陈1701是不是一般在用酶切目的基因使用两个酶直接获得DNA片段? -
越蒲季19888386577 ______ 这要根据你基因上的酶切位点决定,目的基因上如果有两个相同的酶切位点是可以用这种酶切的,再用这种酶切质粒载体(载体上要有这个酶切位点),然后连接.不过这样就不能保证连接的方向,对产物的表达会有影响.所谓双酶切是在目的基因的两端有两种不同的酶切,载体也是用这两种酶,这样可以保证基因的定向连接.这些主要都是构建载体时的设计,先查一下要使用的质粒图谱,决定酶切位点,设计目的基因的PCR引物.

邴严陈1701【DNA重组技术】不同的平末端可以用DNA连接酶连起来吗? -
越蒲季19888386577 ______ 碱基互相配对的 不同的应该是不能配对 不能连起来 催化酶 只是起到加快的作用

邴严陈1701根据所学内容回答下列问题:(1)在构建基因表达载体时,可用一种或者多种限制酶进行切割.为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接,... -
越蒲季19888386577 ______[答案] (1)在构建基因表达载体时,可用一种或者多种限制酶进行切割.为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接,一般选用两种限制酶分别对目的基因、运载体进行切割. (2)在动物细胞培养时,通常在合成培养基中加入适量血清,补充...