酶切回收浓度太低

寿飞映3860GST融合蛋白凝血酶酶切问题
周尝牲18293069449 ______ 可能浓度较低,你的GST也是WB检测的,如果有抗体的话可以检测一下你的蛋白

寿飞映3860要配置多少的酶切体系,载体和插入DNA的量要加多少? -
周尝牲18293069449 ______[答案] 因为内切酶的酶活性单位定义是在50ul反应体系中,最适温度反应1小时能够讲1ugDNA完全酶切的酶量.所以,一般在酶切体系里,DNA的量是可以加到非常大的.因为考虑到后期的纯化后DNA的损失问题,所以推荐酶切体系中的DNA尽量多加一些....

寿飞映3860分子克隆 SDS - PAGE的问题 -
周尝牲18293069449 ______ 1、PCR产物回收时应该注意哪些问题 a.电泳检测时的缓冲液需要新鲜配制,以防止用重复利用的缓冲液时含有其它杂带 b.电泳时间要尽量短,以能分离出条带为准 c.切胶时紫外线照射时间要尽量短2、纯化回收PCR产物的目的是什么 a.用于后...

寿飞映3860酶的浓度如何影响酶切反应 -
周尝牲18293069449 ______ 1、如果底物足够多,随着酶浓度增加,反应速率逐渐加快.(正比) 2、如果底物有限,随着酶浓度增加,反应速率先增加,后不变或下降(底物耗尽)

寿飞映386020ul双酶切体系和10ul双酶切体系的区别 -
周尝牲18293069449 ______ 20ul双酶切体系和10ul双酶切体系的区别:DNA的量是3.5微升 1、产物浓度不同 20ul双酶切体系比10ul双酶切体系产物的浓度高. 2、DNA反应量不同 20ul双酶切体系所含DNA要比10ul双酶切体系含有的DNA多,进行双酶切时所要切的DNA量也...

寿飞映3860双酶切总是切不开.有没有人用过NEB的NotI这个酶 -
周尝牲18293069449 ______ 双酶切怎么老是切不完全需要看具体的体系,质粒的质量,具体的酶 比如 50ul的体系: 酶切片段 43微升 Buffer 5微升 Sal I 1微升 EcoR I 1微升 因为将来要做凝胶回收,体系一定要大,而且不用加水,提出的质粒溶液就直接用于酶切,如果再加水,那样浓度会更低,产量不高. 建议100ul体系加2ul酶,因为1ul酶切不完全.

寿飞映3860为什么我的PCR产物酶切之后什么也没有跑出来? -
周尝牲18293069449 ______ PCR完了以后不能直接加酶切体系去做酶切.整个体系的离子浓度都不对的.这么切不切碎才怪.老老实实的PCR跑胶回收,或者PCR过柱回收再作酶切.变暗是因为体系不对都被切碎了星号反应. 另外PCR体系请扩大一下,25ul做克隆太少了.至少50ul.

寿飞映3860关于实验中的酶切反应 -
周尝牲18293069449 ______ 你酶切完后要注意第一次酶切后胶回收的回收率要高,而且这样分两步做很麻烦,你不如用HindIII和EcoRI均具有较高活性的buffer,那样又快质量又高.

寿飞映3860酶切片段回收不到,急急急
周尝牲18293069449 ______ 将目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下放入干净的离心管中,称取重量.向胶块中加入3倍体积的溶胶液PN;50水浴10min,其间不断温和地上下翻转离心管,以确保胶块充分溶解.将上一步所得溶液加入一个吸附柱CA2中,12000 rpm离心30s,倒掉收集管中的废液,将吸附柱从新放入收集管中.向吸附柱中加入700μl含无水乙醇的漂洗液PW,12000rpm离心30s,倒掉废液,将吸附柱重新防入收集管中.向吸附柱中加入500μl漂洗液PW,12000rpm离心30秒,倒掉废液.将离心吸附柱CA2放回收集管中,12000rpm离心2min,尽量去除漂洗液.将吸附柱置于室温或50℃温箱数分钟,彻底的晾干.加入30ul无菌水保存.

寿飞映3860如何提高限制性酶切的反应效率 -
周尝牲18293069449 ______ 1 DNA纯度 在DNA样品中若含有蛋白质,或没有去除干净制备过程中所用的乙醇、EDTA、SDS、酚、氯仿和某些高浓度金属离子,均会降低限制酶的催化活性,甚至使限制酶不起作用. 2 核酸内切限制酶的缓冲液 核酸内切限制酶的标准缓冲...