酶切时间过长会怎样

慕兰衬3537酶切产物电泳检测无条带这是怎么回事? -
充影马13846216502 ______ 建议你做如下改进: 1. 原始质粒上样2ul,电泳检测,确定质粒质量没问题; 2. 所有酶切体系均改为10ul,其中质粒2ul,酶0.1ul (双酶切时另一种酶也加0.1ul ),buffer终浓度为 1*,剩下为去离子水.酶切时间为4小时左右. 3.电泳用的凝胶最好为新鲜配制的,浓度视质粒大小而定,一般为1%; 电泳的缓冲液最好也是新鲜配制的,电泳电压适当. 1KB的条带拖尾严重,可能是凝胶不新鲜,或者是电泳时电压过高,或者是酶切时间过长.上述建议中已经给出解决方法. 至于你说的奇怪现象,可能质粒已经降解,也可能是酶切过久导致降解,也可能是枪头或者离心管等器材污染,总之保证一切是新鲜的,再做一次.

慕兰衬3537所有限制酶都只能识别同一种按规定的核苷酸吗 -
充影马13846216502 ______ 非也. 1、在实际应用中,要注意,很多限制性内切酶有星活性,如果buffer不合适,酶的浓度太高、酶切时间太长等因素就会产生星活性. 2、在公司提供的说明书上,有的酶切的位点是ANNNT或者类似的写法,中间的N就是不确定的核苷酸

慕兰衬3537质粒dna酶切不完全的可能原因有哪些 -
充影马13846216502 ______ 质粒的量以及酶切时间都会有影响1. 质粒DNA的质量2.限制性内切酶的活性3.限制性内切酶的用量

慕兰衬3537为什么酶切实验要求加样迅速,要在冰上进行操作? -
充影马13846216502 ______ 连接前最好将水、插入片段和载体混合好以后置于45度水浴5min,马上置于冰上冷却,再加入buffer和ligase. 双酶切时间及其体系:需要强调的是很多人建议酶切过夜,其实完全没有必要,我一般酶切3个小时,其实1个小时已经足够.应用大...

慕兰衬3537如何提高连接效率 -
充影马13846216502 ______ 1、低温下长时间的连接效率比室温下短时间连接的好. 2、在体系中加一点切载体的酶,只要连接后原来的酶切位点消失.这样可避免载体自连,应该可以大大提高平端连接的效率. 3、足够多的载体和插入片段是最重要的 . 生物帮上面有这方面的专题介绍, 原位杂交,荧光原位杂交,荧光原位杂交技术,荧光原位杂交原理,荧光原位杂交步骤,原位杂交试剂盒,荧光原位杂交探针,荧光原位杂交应用.

慕兰衬3537酶切后加热灭活时间长了会怎么样?70度30分 -
充影马13846216502 ______ 没有太大影响 EP管的盖子盖紧封严,经常会出现水分丢失严重的问题,尤其是在小体系酶切后金属浴灭活时,灭活后发现EP管里干了,如果是水分蒸发后凝结在管壁上倒好说,轻甩下就哦了

慕兰衬3537质粒酶切得的条带很淡,怎么改进使它变亮些? -
充影马13846216502 ______ 增加酶切质粒的量,可以超过1微克,用4、5微克,同时增加酶的用量,但不要超过体系的十分之一 延长酶切时间 电泳上样时把所有的都点上

慕兰衬3537进行分子实验时,如酶切反应、PCR扩增等,加入酶时应注意哪些问题? -
充影马13846216502 ______ 冰上操作,充分混匀,控制用量,控制反应时间 冰上操作:使用过程中注意对酶的保护,以免失活 充分混匀:充分混匀才能使酶充分发挥作用 控制用量:过多的酶会导致星活性(比如用限制性内切酶的酶切实验),即酶切错误;PCR中酶加得过多也容易导致非特异扩增 控制反应时间:根据具体的酶、具体的实验确定相应的反应时间

慕兰衬3537基因工程中如果标记基因中含有所用限制酶的切割位点,会有什么情况发生...一定会切断标记基因吗... -
充影马13846216502 ______ 是的.如果缩短酶切的时间,让其部分酶切,可能会有标记基因没有被切断的

慕兰衬3537求PCR,酶切大神解决 -
充影马13846216502 ______ 重新设计引物,把酶切位点给换掉.这是最保险也是最简单的方法.还有一种就是半酶切方法,做一个test,减少酶量,缩短酶切时间,这样就会有几种情况出现,至少会出现你需要的片段,这就要你去找合适的酶量和酶切时间.