酶切37一般要几个小时
陶悦度4244双酶切连接转化反应谁了解
袁勉荷17026342581 ______ 1、回收PCR产物:在进行PCR扩增时候,给引物两端设计好酶切位点,一般说来,限制酶的 选择非常重要,尽量选择粘端酶切和 那些酶切效率高的限制酶,如BamHI,HindIII,提前看好各公司的双切酶所用公用的BUFFER,以及各酶在公用...
陶悦度4244关于分子生物学实验中酶切的问题 -
袁勉荷17026342581 ______ 原因可能有很多啊,不过4个小时应该能看到条带了,也可能切下来的太少电泳看不到,也可能没切下来.你可以用这两个酶分别作单酶切跑电泳,那质粒做对照看看是否两个酶都能酶切成功.
陶悦度42445000bp的载体,从中切下50bp的片段,能否电泳看出来啊,要多大的胶浓度才好分辨,谢谢啊! -
袁勉荷17026342581 ______ 50bp的碱基的确有点小,你可以倒2.0%以上的胶,用100v电压跑40分钟试试,但是我估计你的双酶切的酶可能具有星火活性,即会出现把50bp切碎了的可能,所以,建议你37度酶切3小时就电泳,难度还是有点大.
陶悦度4244谁做过酶切质粒的实验啊,制感受态细胞然后转化呢?求详细过程及注意要点! -
袁勉荷17026342581 ______ 大肠杆菌电转化感受态细胞制备 第一天: 1. 将适合菌株(如XL1-Blue, DH5α)置于LB或其他营养丰富的培养基上,在37°C下过夜培养 2. 高温灭菌大的离心瓶(250-500ml)以备第二天摇瓶用 3. 准备几瓶灭菌水(总量约1.5升),保存于冷冻室...
陶悦度4244T 载体与 目的基因连接成功,测序结果也正确.从新摇菌,提取质粒,在进行双酶切,一直切不下来. -
袁勉荷17026342581 ______ 解决办法:1、cla1是一个比较不常见的酶,可能酶切体系和ECOR1的缓冲体系不一样,试着分别酶切,就是先切cla1,然后纯化后切ECOR1;或者查找哪个酶的酶切效率高些,那个后切;2、3个小时可能太短了,我一般都是5个小时,或者过夜;3、可能是你菌挑错了,或污染了,重新调菌或者把原来构建成功的质粒进行转化,再酶切.希望对你有帮助.
陶悦度4244一个单位的的酶活能切多少的DNA -
袁勉荷17026342581 ______[答案] ①限制性内切酶(1 U)通常定义:在指明pH与37℃,在0.05mL反应混合物中,1小时消化1μg的λDNA的酶量为1单位.② 在实际使用中,对质粒DNA 酶切反应而言,限制性内切酶用量可按标准体系1μg DNA 加1 单位酶,消化1-2 小时...
陶悦度4244pcr技术扩增 -
袁勉荷17026342581 ______ PCR(聚合酶链式反应)是利用DNA在体外摄氏95度时解旋,55度时引物与单链按碱基互补配对的原则结合,再调温度至72度左右DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链.由PCR技术制造的PCR仪实际就是一个温控设备,能...
陶悦度4244质粒酶切后 胶回收 -
袁勉荷17026342581 ______ 双酶切胶回收后片段浓度大概多少 如果你是测紫外定浓度,来判断酶切是否完全,这个方法是不靠谱的.只能大致判断你的回收效率. 要验证是否酶切完全,一是看跑胶时的条带数(也不完全靠谱,比如少量质粒没切开,但形成的条带弱,看不见),二是通过连接转化实验,看其自连情况如何. 想把质粒切好,主要是把酶切实验做好,时间、温度、酶量控制好.
陶悦度4244双酶切的20μL反应体系和反应时间如何确定?最好是说明原理.所用的酶都是Takara公司的 -
袁勉荷17026342581 ______[答案] 模板DNA 几百ng-几ug,区别不大 酶1 0.5ul 酶2 0.5ul buffer 去Takara产品目录查双酶切buffer表,按照那个倍数加,有时候需要BSA 水补足 20ul 30或37度,1-5小时都可以.有个别酶需要55度. 注意,酶别加多了,甘油浓度过高影响酶的活性.反应体系...
陶悦度4244限制性内切酶位点被bam甲基化阻断是什么意思 -
袁勉荷17026342581 ______ Bamh1的酶切时间是 2-3小时. Bamh1是一种限制性内切酶.□ 起源 Bacillus amyloliquefaciens H□ 活性测定用底物 λ DNA□ 甲基化的影响 不受CG methylase、dam methylase、dcm methylase (根据识别序列的后续碱基) 的影响.□ Star活性 高甘油浓度、Mn2+存在、低离子强度条件下,识别序列会发生变化.□ 使用注意 37℃反应也表现出相同的酶活性,但不如30℃时稳定.