重叠延伸pcr原理图解

凌希强4563请教重叠PCR问题
丘怪姬17093938946 ______ 按以下体系及循环参数作 A:371 bp;B:670 bp 然后:25微升体系(A:50ng,B:50ng,dNTP:0.4uM/ul,pfu:0.3uM,聚合酶buffer ) 然后:95度,4min, 94度,55s 65度,40s 72度,1min 5个循环. 72度,2min 然后在72度,2min的过程中就再加入25微升补充体系,(dNTP:0.4uM/ul,pfu:0.3uM,聚合酶buffer,上下游引物各:0.1uM/ul) 混合成50微升体系 95度,4min, 94度,50s 65度(最好退火温度比65高或低),40s 72度,1min 30循环. 72度,10min

凌希强4563定量PCR的过程及原理 -
丘怪姬17093938946 ______ http://baike.baidu.com/view/1478017.htm

凌希强4563做SOE PCR 无论如何都连接不上,哪位能帮忙想想办法!~~~ -
丘怪姬17093938946 ______ 重叠延伸PCR技术成功的关键是重叠互补引物的设计.可以有三种方法来设计引物,具体如下图所示.引物F及R为基因两端特异引物,其中Fm及Rm为中间引物.其中引物...

凌希强4563重叠PCR的原理SOE - PCR原理 -
丘怪姬17093938946 ______[答案] 重叠延伸PCR技术(gene splicing by overlap extension PCR,简称SOE PCR)由于采用具有互补末端的引物,使PCR产物形成了重叠链,从而在随后的扩增反应中通过重叠链的延伸,将不同来源的扩增片段重叠拼接起来.此技术利用PC...

凌希强4563基因扩增的基因扩增 - PCR技术 -
丘怪姬17093938946 ______ 多聚酶链式反应的原理类似于DNA的天然复制过程.在待扩增的DNA片段两侧和与其两侧互补的两个寡核苷酸引物,经变性、退火和延伸若干个循环后,DNA扩增2n倍. 1.变性:加热使模板DNA在高温下(94℃)变性,双链间的氢键断裂而形...

凌希强4563分段pcr怎么分段?遵循什么原则?我的基因全长是6800左右,以前没做过分段的pcr,请人指教,最好能详细点. -
丘怪姬17093938946 ______ 可以采用重叠延伸PCR方法扩增,把基因分成几段之后,分别扩增、回收,混合后用作模板,然后用全长基因的前后引物进行扩增,设计引物的时候,重合部分不能少于10-15个碱基

凌希强4563PCR基本原理,扩曾步骤及其特点 -
丘怪姬17093938946 ______ 1.PCR技术基本原理:PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物.2.PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成:①模板DNA的变性:模板DNA经加 热至93℃左右一定时间后,使模...

凌希强4563论述:利用重叠延伸PCR技术产生定点突变和缺失突变. -
丘怪姬17093938946 ______[答案] 采用重叠引物PCR介导的定点突变实验是一种快速有效的在基因中特定位点引入特定突变的有效技术.该技术采用具有互补末端的引物,使PCR产物形成了重叠链,从而在随后的扩增反应中通过重叠链的延伸,将不同来源的扩增片段重...

凌希强4563PCR的基本原理是什么?其基本流程如何?
丘怪姬17093938946 ______ 基本原理:在模板、引物、4种dNTP和赖热DNA聚合酶存在的条件下,特异扩增位于两段已知序列之间的DNA区段的酶促合成反应. 基本步骤:变性:加热使双链DNA变为单链; 退火:降温使引物和互补模板在局部形成杂交链 ;延伸:耐热DNA聚合酶按5'→3'方向催化以引物为起始点的延伸反应.生物一一四.

凌希强4563各位高手谁能给我详细的讲解一下PCR技术的过程 -
丘怪姬17093938946 ______ 聚合酶链式反应,简称PCR.聚合酶链式反应(PCR)是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法,由高温变性、低温退火(复性)及适温延伸等几步反应组成一个周期,循环进行,使目的DNA得以迅速扩增,具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点.它不仅可用于基因分离、克隆和核酸序列分析等基础研究,还可用于疾病的诊断或任何有DNA,RNA的地方.聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,简称PCR)又称无细胞分子克隆或特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增技术.