饱和生理盐水怎么配制

实验原理：

石蜡切片是最基本的切片技术，冰冻切片和超薄切片等都是在石蜡切片基础上发展起来的。 苏木素与伊红对比染色法（简称 H.E.对染法）是组织切片最常用的染色方法。这种方法适 用范围广泛，对组织细胞的各种成分都可着色，便于全面观察组织构造，而且适用于各种固 定液固定的材料，染色后不易褪色可长期保存。经过 HE 染色，细胞核被苏木素染成蓝紫色， 细胞质被伊红染色呈粉红色。

一、器材及试剂：

1. 器材：

切片刀，切片机，恒温箱，蜡杯，酒精灯，解剖刀，解剖剪，解剖盘，培养皿，镊子， 单面刀片，毛笔，包埋盒，染色缸，盖玻片，载玻片，玻片盘，树胶，树胶瓶，显微镜，温 度计，脸盆，水浴锅。 切片机，切片刀，温台，恒温箱，解剖刀，镊子，剪刀，解剖针，单面刀片，小台木，洒精灯，包埋纸盒，染色缸，烧杯，水盆，熔蜡炉，蜡杯。

2．试剂：

中性福尔马林固定液、各种浓度的酒精、二甲苯、石蜡、蜂蜡、苏木精染液， 1%伊 红酒精溶液，1%盐酸酒精溶液，甘油蛋白粘片剂，中性树胶。 卡诺（Carnoy）固定液，埃利希苏木精染液，1%伊红酒精溶液，1%盐酸乙醇液，各级酒精（30%、50%、70%、80%、90%、95%、100%），二甲苯，甘油蛋白粘片剂，中性树胶。

3. 材料：

鼠肝、肾、心肌、骨骼肌或其他组织、大豆或小麦、绿豆、洋葱、大蒜、蚕豆的根、茎、叶等。

二、实验原理：

石蜡切片是最基本的切片技术，冰冻切片和超薄切片等都是在石蜡切片基础上发展起来 的。苏木素与伊红对比染色法（简称 H.E.对染法）是组织切片最常用的染色方法。这种方 法适用范围广泛，对组织细胞的各种成分都可着色，便于全面观察组织构造，而且适用于各 种固定液固定的材料，染色后不易褪色可长期保存。经过 HE 染色，细胞核被苏木素染成蓝 紫色，细胞质被伊红染色呈粉红色。

三、试剂配法：

1．中性甲醛固定液：

甲醛（37%-40%，市售，本所购买即为此浓度）\t100mL

磷酸氢二钠\t6.5

磷酸二氢钾（钠）\t4g

双蒸水\t900mL

2．苏木精、伊红染色液

3．1%盐酸乙醇液

盐酸  1 份

70%酒精  100 份

4．甘油蛋白贴片剂：

蛋白  50 ml

甘油  50 ml

水杨酸钠（防腐剂） 1g

配制时将鸡蛋一个打破入碗或杯中，去蛋黄留下蛋白，用玻棒调打成雪花状泡沫，然后用粗纸或双层纱布过滤到量筒中，经数小时或一夜，即可滤出透明蛋白液。此时在其中再加等量的甘油，稍稍振摇使两者混合。最后加入防腐剂（水杨酸钠）作防腐用。可保存几个月。

四、实验步骤：

1．取材

颈椎脱臼法处死小鼠，打开腹腔，剪取肝组织（或其他组织）。 切取的组织块不宜太大，以利于固定剂穿透，通常以 5mm×5mm×2mm 或 10 mm×10mm×2 mm 为宜。取下所需要的肝组织，切成一小块 2－3mm 厚。

注意事项：

（1）取材动作要迅速，不宜作太久的拖延以免组织细胞的成分、结构等发生变化。

（2）切片材料应根据需要观察的部位进行选择，尽可能不要损伤所需要的部分。

2．固定

将切好的肝组织用生理盐水组织洗一下，立即投入中性福尔马林固定液中固定，固定30－50min。

注意事项：

（1）一般固定液，都以新配为好，配好后应贮存在阴凉处，不宜放在日光下，以免引起化 学变化，失去固定作用。

（2）有些混合固定液的成份之间会发生氧化还原作用，一定要在使用前才混合，如果混合 太早，固定时就没有作用了。

（3）固定材料时，固定液必须充足，一般为材料块的 20~30 倍，有些水分多的材料，中 间应更换 1-2 次新液。

（4）材料固定完毕后，保存于严密紧塞或加盖的容器里，同时在容器外上标签，并随同材料在溶液中投入相应的标签，以免相互混淆。标签上注明固定液、材料来源、日期等。标签上的文字，应用黑色铅笔或绘图黑墨水书写。

3. 洗涤

材料经固定后,流水冲洗，数小时或过夜。

4. 脱水

材料依次经 70%、80%、90%各级乙醇溶液脱水，各 30min，再放入 95%、100%各 2 次，每次 20min。

注意事项：

（1）脱水必须在有盖的玻璃品中进行，防止吸收空气中的水分。

（2）在更换高一级的脱水剂时，最好不要移动材料以免损坏，可用吸管吸出器皿中的脱水 剂，再用吸水吸尽器皿内剩余液，然后于皿中加入高一级脱水剂。

（3）在低浓度酒精中，每级停留不宜太长，否则易使组织变软，助长材料的解体。

（4）在高浓度或纯酒精中，每级停留的时间也不宜太长，否则会使组织变脆，影响切片。

（5）如需过夜，应停留在 70%酒精中。

（6）脱水必须彻底，否则不易透明，甚至使透明剂内出现白色混浊现象

5．透明

纯酒精、二甲苯等量混合液 15min，二甲苯Ⅰ15min、Ⅱ15min（至透明为止）。 由于乙醇与石蜡不相溶，而二甲苯既能溶于乙醇又能溶于石蜡，所以脱水后还要经过二甲苯以过渡。当组织中全部被二甲苯占有时，光线可以透过，组织呈现出不同程度的透明 状态。

透明注意事项

（1）使用透明剂时，要随时盖紧盖子，以免空气中的水分进入。

（2）更换每级透明剂，动作要迅速，一方面为了不使材料块干涸，另一方面能避免吸收湿气。

（3）在透明过程中， 如果材料周围出现白色雾状，说明材料中的水未被脱净，应退回纯 酒精中重新脱水，然后再透明。

6．透蜡

放入二甲苯和石蜡各半的混合液 15min，再放入石蜡Ⅰ、石蜡Ⅱ透蜡各 50-60 分钟。 透蜡的目的是除去组织中的透明剂（如二甲苯等），使石蜡渗透到组织内部达到饱和程度以便包埋。透蜡时间根据组织大小而定。透蜡应在恒温箱内进行，并保持箱内温度在55-60℃左右，注意温度不要过高，以免组织发脆。一般置于恒温箱 0.5h。

透蜡注意事项

（1）尽量保持在较低温度中进行，以石蜡不凝固为度；

（2）透蜡温度要恒定，不可忽高忽低；

（3）操作要迅速，力求在最短的时间内完成石蜡透入过程，以免引起组织变硬、变脆、收 缩等。

7. 包埋

包埋时，用镊子夹取石蜡模子（金属质地）在酒精灯上稍加热，放在平的桌面上，从 温箱中取出盛放纯石蜡的蜡杯，倒入少许石蜡。再将镊子在酒精灯上稍加热，夹取材料将切 面朝下放入蜡模中，排列整齐。再放上包埋盒，轻轻倒入熔蜡。

8. 切片

①将已固定和修好的石蜡块装在切片机的夹物台上。

②将切片刀固定在刀夹上，刀口向上。

③摇动推动螺旋，使石蜡块与刀口贴近，但不可超过刀口。

④调整石蜡块与刀口之间的角度与位置，刀片与石蜡切片约成 15 度左右。

⑤调整厚度调节器到所需的切片厚度，一般为 4-10 微米。

⑥一切调整好后主可以开始切片。此时右手摇动转轮，让蜡块切成蜡带，左手持毛笔将蜡带 提起，摇转速度不可太急，通常以 40-50r/min。

⑦切成的蜡带到 20-30cm 长时，右手用另一支毛笔轻轻将蜡带挑起，以免卷曲，并牵引成 带，平放在蜡带盒上，靠刀面的一面较光滑，朝下，较皱的一面朝上。

⑧用单面刀片切取蜡片一小段，放在载玻上加水一滴，置于放大镜或显微镜下观察切片是否 良好。

⑨切片工作结束后，应将切片刀取下用氯仿擦去刀上沾着的石蜡，把切片机擦拭干净妥为保 存。

9. 展片、贴片

打开水浴锅，使水温维持在 40-45℃，另准备 30%乙醇溶液。

①  切片时，将一碗 30%乙醇溶液放于切片机旁的桌面上。

② 用小镊子夹取预先用刀片割开的蜡带，放在乙醇溶液的水面上，使切片展开。

③小镊子轻轻地将连在一起的切片分开，用一个载玻片将切片完整，已展开的切片捞至温水 中，使之充分展开。

④ 另取洁净的载玻片，捞起展开的切片，使其位于切片 1/3 处，另一端（磨边，粗糙的一 端）磨面上标记或贴上标签，放于切片架上。

10. 脱蜡复水

将水浴锅温度调至 60℃，待水温控制在 60℃时，将切片连同切片架放入一干燥的染色 缸内，放入水浴锅中，盖上盖子（可密封），30min 至蜡熔化。

之后，石蜡切片经二甲苯Ⅰ、Ⅱ脱蜡各 5min，然后放入 100%、95%、90%、80%、70%各级酒精溶液中各 3-5min，再放入蒸馏水中 3min。

11． 染色

切片放入苏木精中染色约 10-30min。 染色时间应根据染色剂的成熟程度及室温高低，适当缩短或延长。室温高时促进染色，染色时间可短些，否则可适当延长时间，冬季室温低时可放入恒温箱中染色。

12．水洗

用自来水流水冲洗约 15min。使切片颜色变蓝（或放入碱性水中也可），但要注意流水 不能过大，以防切片脱落。

13．分化

将切片放入 1%盐酸乙醇液中褪色，约 2 秒至数十秒钟。见切片变红，颜色较浅即可。

14．漂洗

切片再放入自来水流水中使其恢复蓝色。

15．脱水Ⅰ

切片入 50%乙醇→70%乙醇→80%乙醇中各 3-5min。

16、复染

用 0.5%伊红乙醇液对比染色 1-3min。 伊红主要染细胞质，着色浓淡应与苏木精染细胞核的浓淡相配合，如果细胞核染色较浓，细胞质也应浓染，以获得鲜明的对比。反之，如果细胞核染色较浅，细胞质也应淡染。 可在伊红乙醇液中滴加数滴冰醋酸助染，促使细胞质容易着色，并且经乙醇脱水时不易褪色。

17．脱水Ⅱ

将切片放入 95%乙醇中洗去多余的红色，然后放入无水乙醇中 3-5min。最后用吸水 纸吸干多余的乙醇。

18．透明

切片放入二甲苯Ⅰ、Ⅱ中各 3-5min。

二甲苯应尽量保持无水，应经常更换，或用纱布包无水硫酸铜放入染色缸内吸收水分。 切片如在二甲苯中出现白雾现象，说明脱水未尽，应退回乙醇中重新脱水，否则切片难以镜 检。

19．封藏：中性树胶封存 因切片经二甲苯透明，使用中性树胶作为封藏剂，树胶可用二甲苯稀释至合适的稠度。

封藏的方法：

封片前应根据材料的大小，选用不同规格的盖玻片。材料透明后，在桌上放一张洁净的 吸水纸，将含材料的载玻片从二甲苯中取出放在纸上（切片的一面向上），迅速地在切片的 中央滴一滴树胶（千万不能待二甲苯干燥后再进行），用右手持小镊子轻轻地夹住盖玻片的 右侧，稍为倾斜使其左侧与封藏剂接角，然后再缓慢地将盖玻片放下，这样就可以减少或避 免产生气泡。如胶液不足，可以用玻棒再滴一滴树胶从盖玻片边缘补足。如胶液过多，可在 干燥以后用刀刮去，并用纱布蘸二甲苯拭去残留的树胶。 染色结果：细胞核被苏木素染成蓝色，细胞质被伊红染色呈粉红色。

郝质侧3059生理盐水怎么配置呢?要平常生活中很方便配置的办法!
万菁储19359388068 ______ 生理盐水的浓度0.9%,也就是说要配制1000克的生理~需用1000*0.9%=9克的氯化钠在加入1000-9=991克的水搅拌使其充分溶解即可.

郝质侧3059如何配制500ml生理盐水?还有计算过程及配制过程?
万菁储19359388068 ______ 病情分析:正常情况下,生理盐水也就是0.9%的氯化钠注射液.如果按100毫升生理盐水进行计算的话,其配制方法如下:首先要领取100毫升的纯净水,然后称取0.9克的氯化钠,将氯化钠加入到纯净水当中,适当搅拌均匀之后就配置成功.注意这里所使用的程序都是无菌的,要达到相关的无菌要求.

郝质侧3059怎样配置0.9%的生理盐水? -
万菁储19359388068 ______ 取氯化钠0.9克,加入99.1ml蒸馏水中,就是浓度为0.9%的生理盐水100ML.具体过程如下:1、计算:0.9%的生理盐水的密度是1g/ml,配置100ml生理盐水需要氯化钠的质量=100ml*1g/ml*0.9%=0.9g,需要水的体积=(100ml*1g/ml-0.9g)÷1g/ml=99.1ml2、称量用托盘天平称取氯化钠0.9g,并倒入烧杯中3、量取用100ml量筒量取99.1ml水,并倒入烧杯中4、溶解用玻璃棒搅拌使氯化钠全部溶解5、装瓶将配置好的生理盐水转入细口瓶中,并贴上标签.

郝质侧3059生理盐水怎么配 -
万菁储19359388068 ______ 首先看你的用途,口服及外用的不是很严格,在开水中加盐,到可以感受到有微微的咸味,也就是说能感到这不是单纯的水时就行.而注射用生理盐水则要求严格.必须在无菌环境中,用无菌的化学纯医用氯化钠9克加无菌蒸馏水溶解至1000毫升.还要批量抽检杂质量,致热源等,还必需有药品生产资质.,

郝质侧3059实验室生理盐水的配方是什么?? -
万菁储19359388068 ______ 生理盐水 配方一 各种动物需用的生理盐水 哺乳类 需用生理盐水浓度是0.9%.称取0.9克氯化钠,溶解在少量蒸馏水中,稀释到100毫升. 鸟类 需用的生理盐水浓度是0.75%.称取0.75克氯化钠,溶解后用蒸馏水稀释到100毫升. 两栖类 需用的...

郝质侧3059生理盐水的配制
万菁储19359388068 ______ 9克盐+1000毫升水即可,简单得很

郝质侧3059如何配置生理盐水?
万菁储19359388068 ______ 生理盐水是0.9%的氯化钠(也就是食盐)溶液医学上一般直接用100克水加1克氯化钠调配如果去医院吊瓶的话他会给你开建议楼主千万不要拿这些东西开玩笑,医学上用的生理盐水不是简简单单用水和盐就能做得,他们用的高纯度氯化钠和蒸馏水和我们能买到的不是一个级别的,而且你在做的时候也不可能有无菌工艺

郝质侧3059用生理盐水如何配3% -
万菁储19359388068 ______ 食材清单:1. 盐:3克2. 水:97克制作步骤:1. 准备食材:称取3克的盐和97克的水.2. 混合:将盐溶解在水中,搅拌均匀.3. 盐水配制完成:得到的液体就是3%的生理盐水.以上就是用生理盐水配制3%盐水的食材清单和制作步骤.

郝质侧3059如何配置100g质量分数为百分之二十的生理盐?如何配置100g质
万菁储19359388068 ______ 假定:100克质量分数为20%的生理盐水中含盐X克. 则:X=100*20%=20克.蒸馏水重量=100-20=80克. 即:将20克盐放入80克蒸馏水中并使其充分融化,便可配制成质量分数为20%的生理盐水100克.

郝质侧3059如何配置100毫升生理盐水?要求写计算过程和操作程序
万菁储19359388068 ______ 生理盐水就是0.9%的氯化钠水溶液,需要氯化钠:100mL*1g/cm³*0.9%=0.9g,水100mL*1g/cm³-0.9g=99.1g,99.1g/1g/cm³=99.1mL. 先用托盘天平准确称取0.9克氯化钠,放入烧杯中.再用量筒量取99.1mL毫升的蒸馏水,倒入盛氯化钠的烧杯中,用玻棒搅拌,使之充分溶解即可. 只要有耳麦和摄像头,就能实现相当于生活中的面对面的辅导,方便、灵活、高效.启智网校,专业教师团队,帮你把握重点、理清思路、快速提高成绩!可以先试听,通过淘宝交费http://qizhi8.taobao.com/.联系Q:1067889958