100微升稀释100倍怎么做

一、实验用途

检测目的蛋白表达量

二、实验材料与仪器

PBS，裂解液，ddH2O，30% 预制胶，Tris-HCl (pH8.8)，Tris-HCl (pH6.8)，SDS，APS，TEMED，BCA 的 A 液及 B 液，loading buffer，marker，甲醇，电泳液，转膜液，脱脂奶粉，TBST，一抗及对应二抗，显影 A 液，细胞刮刀，1.5ml 离心管，移液枪及枪头，96 孔板，离心机，电泳槽，PVDF 膜，摇床，曝光机。

三、实验步骤

1. 蛋白样品制备

• 倒掉培养液，PBS 洗涤，弃净 PBS，加入裂解液，置于冰上或 4℃ 冰箱裂解 10min，用细胞刮刀及移液枪将细胞碎片及裂解液移至 1.5ml 离心管，继续裂解 20min。
• 于 4℃ 离心机离心（14000 rpm，15min），取上清，置于 -20℃ 冰箱保存。

2. 蛋白含量的测定（BCA）

• 取出蛋白样品，置于冰上融化。取 4 微升样品，20 倍稀释（4 微升样品+76 微升 ddH2O）。
• 配制 BCA 液（A:B=50:1），在 96 孔板上每孔加入 100 微升 BCA 液，加入 20 微升被试，每个样品重复 3 孔。避光 37℃ 30 min，于 562 nm测定，计算蛋白浓度。

3. 电泳

• 玻璃板夹好，检漏后，加入 10% 分离胶。用移液枪加胶，加异丙醇，约 30 min 后分离胶凝固，倒去异丙醇，加入 5% 浓缩胶。插入梳子，约 30min 后浓缩胶凝固，放入电泳槽。
• 配制上样的样品，100℃ 金属浴 15min，上样，上 marker，60V 电泳，跑过浓缩胶后可加到 120V，跑至底层后可停止。

4. 转膜

• 取适宜大小的 PVDF 膜，浸泡在无水乙醇中 2 in 活化，移入转膜液中浸泡。
• 三明治结构：夹子的黑色一面+海绵垫+三层滤纸+胶+膜+三层滤纸+海绵垫+夹子的透明一面，夹紧。放入转移槽，夹子的黑色一面对槽的黑色一面，夹子的透明色一面对槽的红色一面，放入冰中，或在 4℃ 冰箱转膜，250mA，2.5h。
• 用丽春红染色后切膜，用 TBST 洗净。

5. 封闭

• 以 TBST 作溶剂配制 5% 脱脂奶粉。
• 膜浸泡于 5% 脱脂奶粉，于摇床上低速摇晃，封闭 2 h，弃去 5% 脱脂奶粉，以 TBST 于摇床上高速摇晃，洗涤 5 min，重复三次。

6. 一抗孵育

• 加入一抗，于 4℃ 冰箱孵育过夜。

7. 二抗孵育

• 回收一抗，TBST 洗涤 15 min，重复三次。
• 加入对应的二抗，于摇床上常温孵育 2h，TBST 洗涤 15min，重复三次。

8. 显影

• 将显影 A 液和 B 液以 1:1 配制，将膜浸入显影液 5s 后，即可在曝光机上曝光。

盖眉歪34141mL溶剂分别稀释1倍、2倍、3倍、4倍,是指分别加多少mL的水? -
蓬杜丽13820142062 ______ 稀释1倍、2倍、3倍、4倍,是指分别加0mL、1mL、2mL、3mL的水. 稀释倍数是指稀释前溶液浓度除以稀释后的溶液浓度所得的商. 例如本题中稀释2倍,原液浓度为1,加入1mL水稀释之后浓度变为0.5,所以原液浓度/稀释后浓度=1/0.5=2...

盖眉歪3414若将0.1mol/L的HCL准确稀释10倍、100倍,可以采用什么方法? -
蓬杜丽13820142062 ______[答案] 上面说的是开始给定盐酸是特殊体积的情况下,既正好是容量瓶的十分之一或是百分之一.若是开始给定体积不是这样的,... 用电子天平称量就是了. 稀释十倍还好说,稀释一百倍真是折磨认了. 如果原来没有给定盐酸的体积,只是要求配置特定浓度的...

盖眉歪3414COD测试钱,样品COD估计值较高,怎么稀释溶液?测试有什么技巧? -
蓬杜丽13820142062 ______ 以稀释100倍为例吧:先去取水样10毫升稀释到100毫升,再取稀释水样10毫升稀释到100毫升.这样共稀释10*10=100倍. 用重铬酸钾法测试时有以下的技巧:1、酸性重铬酸钾氧化性很强,可氧化大部分有机物.如果要排除氯离子的干扰,在回流时向水样中加入硫酸汞,使成为络合物以消除干扰,氯离子含量高于2000mg/L的样品应先被定量稀释,使含量降低至2000mg/L以下,再行测定;如果水中含亚硝酸盐较多,可预先在重铬酸钾溶液中加入氨基磺酸便可消除其干扰;2、用0.25mo1/L浓度的重铬酸钾溶液可测定大于50mg/L的溶液COD值; 当然,也可以用COD快速测定仪来测定溶液COD值. 希望对你有所帮助!

盖眉歪3414请问如果配置10ml20%Nacl溶液,欲将其稀释100倍需加多少水呢,稀释和稀释到有如何区别吗? -
蓬杜丽13820142062 ______ 因为没有20%NaCl的密度所以不好算,假设10ml20%Nacl溶液就是10g,那么就需要加入990g水. 稀释一般讲稀释多少倍,而稀释到一般会说稀释到百分之几,说法不一样概念也不一样,但是相互之间很好转化. 比如题中稀释100倍,换种说法就是稀释到原来的1%,也可以直接说稀释到0.2%

盖眉歪3414逐级稀释溶液浓度应考虑哪些因素? -
蓬杜丽13820142062 ______ 一般规定,一次稀释不能超过100倍.逐级稀释主要是为了减少误差.稀释100倍,取1ml浓溶液稀释到100ml,如果取样误差是0.02ml,那么会造成稀释后稀溶液浓度存在2%的相对误差.如果你分2次,每次稀释10倍,那么你每次要取10ml浓溶液,稀释到100ml,取样误差这时候仍然是0.02ml,那么每次带来的稀溶液相对误差就只有千分之二,两次就算命苦最终被叠加了,也只有千分之四,远小于一次稀释的百分之二.哦,当然,如果你分2次的时候是每次取1ml,稀释到10ml,那么你的相对误差反倒是百分之四,更不准了.所以重点指出的是所用器具的选择要与方法配套.

盖眉歪3414化学实验中要将样品稀释100倍,应该取多少样和水 -
蓬杜丽13820142062 ______ 加99mL水,使总体积为100mL稀释100倍和稀释到100倍可以理解成一个意思

盖眉歪3414某溶液A,浓度为70微克每毫升,如何在100ml容量瓶中将溶液A稀释为1微克每毫升?请说下计算方法 -
蓬杜丽13820142062 ______ 70微克每毫升缩小70倍就是1微克每毫升.但是100mL的容量瓶只有一个刻度,所以只能稀释100倍.用移液管取100/70=1.41mL稀释都100mL就可以了

盖眉歪34141ml样液于100ml容量瓶中,加水至刻度,再取稀释的液体10ml于100ml容量瓶中,加水至刻度,一共稀释了多少倍 -
蓬杜丽13820142062 ______[答案] 稀释了:100*(100÷10)=1000倍

盖眉歪3414稀释溶液时,稀释倍数多少合适 -
蓬杜丽13820142062 ______ 一般100倍以内合适,误差还较小.

盖眉歪3414十毫升的溶液定容一百毫升,它被稀释了多少倍? -
蓬杜丽13820142062 ______[答案] 是被稀释了10倍 100/10=10倍