amp抗生素失效温度
材料试剂：胰化蛋白胨，酵母提取物，琼脂，NaCl，NaOH（调 pH），氨苄青霉素，卡那 霉素，质粒提取试剂盒
仪器：高压灭菌锅，42℃恒温水浴锅，，恒温摇床（37℃,225rpm），无菌培养板，消毒 1.5ml 离心管，消毒枪头，无菌操作台
实验步骤：
1. LB 培养基的配制：
在 950 ml 去离子水中加入: 胰化蛋白胨 10g 酵母提取物 5g NaCl 10g 摇 动容器直至溶质溶解.用 5mol/LNaOH 调 pH 至 7.0.用去离子水定容至 1L.在 15psi 高 压下蒸汽灭菌 20min.
固态培养基
LB 固体培养基及倒板 ：
（1）.配制：100mlLB 培养基加入 1.5g 琼脂粉
（2）.抗生素的加入：高压灭菌后，将融化的 LB 固体培养基置与 55℃的水浴中，待培 养基温度降到 55℃时（手可触摸）加入氨苄抗生素（终浓度为 50μg/ml），以免温度过 高导致抗生素失效，并充分摇匀。
（3）.倒板：一般 10ml 倒 1 个板子。培养基倒入培养皿后，打开盖子，在紫外下照 10-15分钟。
（4）.保存：用封口胶封边，并倒置放于 4℃保存，一个月内使用。
2. 从-70℃冰箱中取 200μl 感受态细胞悬液，室温下使其解冻，解冻后立即置冰上。
3. 加入质粒 DNA 溶液（含量不超过 50ng，体积不超过 10μl），轻轻摇匀，冰上放置 30分钟后。
4. 42℃水浴中热击 45s/90s，热击后迅速置于冰上冷却 3-5 分钟。
5. 向管中加入 1ml LB 液体培养基（不含 Amp），混匀后 37℃振荡培养 1 小时，使细菌恢 复正常生长状态，并表达质粒编码的抗生素抗性基因（Ampr ）。
6. 将上述菌液摇匀后取 100μl 涂布于含 Amp 的筛选平板上，正面向上放置半小时，待菌 液完全被培养基吸收后倒置培养皿，37℃培养 16-24 小时。
同时做两个对照：
对照组 1： 以同体积的无菌双蒸水代替 DNA 溶液，其它操作与上面相同。此组正常情 况下在含抗生素的 LB 平板上应没有菌落出现。
对照组 2： 以同体积的无菌双蒸水代替 DNA 溶液，但涂板时只取 5μl 菌液涂布于不 含抗生素的 LB 平板上，此组正常情况下应产生大量菌落。
大肠杆菌的扩增
1. 从 LB 平板上挑取新活化的单个菌落，接种于 3-5ml LB 液体培养基中，37℃下振荡 培养 12 小时左右，直至对数生长后期。将该菌悬液以 1：100-1：50 的比例接种 于 100ml LB 液体培养基中，37℃振荡培养 2-3 小时至 OD600 ＝0.5 左右。
2. 取上述培养液置于冰中 10min，之后转移到已灭菌的 50ml 离心管中再于冰上放置5min
3. 于 4℃离心，2700rmp，10min，弃上清，收集细菌
4. 质粒的提取
准备大肠杆菌质粒提取盒和扩增的带质粒大肠杆菌培养液
5. 质粒鉴定（琼脂糖凝胶电泳）
质粒转染细胞株
材料
细胞株、质粒、培养基、链霉素/青霉素（双抗）、FCS（小牛血清）、PBS（磷酸盐缓冲溶液）、胰酶/EDTA 消化液、转染试剂（Lipofectamine TM2000）
实验步骤
Ⅰ.准备细胞：
贴壁细胞：转染前 24 h，在 500 µL 无双抗完全培养基中接种 0.5-2×105 个细胞， 转染时细胞融合度为 80 - 90% 。 ( 注：铺板时要将细胞消化完全混匀，避免细胞 堆积生长。)
II ．对于每个转染样品，按下面的方法准备：
（1）用 50 µL Opti-MEM 稀释 0.8 µg 质粒 DNA，轻轻吹吸 3 - 5 次混匀，室温下 静置 5 min。
（2）轻轻颠倒混匀转染试剂，用 50 µL Opti-MEM 稀释 2.0 µL LipofectamineTM2000，轻轻吹吸 3 - 5 次混匀，室温下静置 5 min。
（3）混合转染试剂和质粒 DNA 稀释液，轻轻吹吸 3 - 5 次混匀，室温下静置 20 min。注: 转染复合物一旦形成，应立即加入培养皿中进行细胞转染。
（4）转染复合物加入到 24 孔细胞板中，100 µL/孔，前后轻摇细胞板混合均匀。
（5）将细胞板置于 37℃、5% CO2 培养箱中培养 6 h 左右，进行换液，换成含 10% 血清的普通培养基，在 37℃，5％CO2 孵育箱中继续培养 24h 左右。 稳定转染细胞株的筛选（各种细胞用什么抗生素筛选呢）
从 37℃，5％CO2 孵育箱中取出培养皿，弃去含转染试剂的培养基，用 PBS 冲洗细胞 2 遍，胰蛋白酶消化，接种 1/2 的细胞到 100 mm 培养皿中，加入含 500 µg/ml G418 的 新鲜培养基，每 2-3 天更换一次新的筛选培养基，每天观察细胞的死亡情况。当正常细胞完全死亡后，换用新的不含 G418 的培养基培养。每天观察细胞生长状态。在细胞达到 60%汇合率时再用含 500 µg/ml G418 的培养基筛选一次。当细胞达到 90%以上汇合率时将细 胞转移至培养瓶中继续培养（转染后 10-12 天左右）。以后每隔 4-5 天再用含 500 µg/ml G418 的培养基筛选。直到稳定表达转染质粒的细胞达到一定数量后可以收集样品（约转染 后 15 天左右）。以后继续培养时加入的 G418 浓度降一半。
","gnid":"95eb1dd2f326f842f","img_data":[{"flag":2,"img":[{"desc":"","height":808,"title":"","url":"https://p0.ssl.img.360kuai.com/t01975e0ce5a884def7.jpg","width":1280}]}],"original":0,"pat":"art_src_0,fts0,sts0","powerby":"pika","pub_time":1705371848000,"pure":"","rawurl":"http://zm.news.so.com/d49cd4768fea2a4cf24a99593b52c3b3","redirect":0,"rptid":"a5d24fc1fee674c3","rss_ext":[],"s":"t","src":"北京德航五洲生物科技有限公司","tag":[{"clk":"ktechnology_1:抗生素","k":"抗生素","u":""},{"clk":"ktechnology_1:细胞","k":"细胞","u":""}],"title":"质粒转染实验步骤
鞠缸咱3963孩子得了支气管炎,用抗生素打完针可以再去推拿吗? - 久久问医
文甘关18679894060 ______ 你好,孩子支气管炎,首先需要用抗生素来治疗的,并且配合止咳化痰,解痉平喘,雾化吸入等,另外小儿推拿能辅助治疗支气管肺炎.气管不好老咳嗽,也不排除支气管哮喘的可能性. 孩子患有支气管炎,建议做个系统的检查,同时化验过敏原,然后进行对症治疗,食物可以吃些白萝卜,木耳,养阴润肺的食物.尽量不吃甜食,不吃辛辣刺激性食物,平时要适当多喝水.
鞠缸咱3963女性服用抗生素药物有什么副作用?日常用药要注意什么? - 久久问医
文甘关18679894060 ______ 你好,日常长期的服用抗生素药物对身体肝脏和肾脏有一定的危害,同时长期的用药还容易产生耐药性,甚至是引起女性阴道炎的出现,而且会导致免疫功能低下,危害健康.日常要谨慎使用服用抗生素药物,同时避免长期的服用药物,同时日常注意合理的饮食,养成良好的习惯,注意合理饮食,帮助更好的治疗疾病.
鞠缸咱3963抗生素的药物一次吃几粒,一天几次,有什么注意事项吗? - 久久问医
文甘关18679894060 ______ 你好,很高兴为你解答,一般药物的说明书上会有用法用量,只要根据具体的病症服用就可以的,注意出现不良的反应不要太过担心,一般是有呕吐,头晕的情况是正常的现象,及时休息.抗生素类的药物的服药还是要在医生的指导下进行药物的使用,一般药物存在不同的规格还是要仔细阅读说明服用.注意抗生素的药物的服用是不能超过一周的,是会有依赖性的,要多喝水.
鞠缸咱3963使用抗生素的耐药性能不能消除? - 寻医问药网 - xywy.com
文甘关18679894060 ______ 我们就需要更换其他种类的抗生素.一般来说刚换药之后.以前使用药物所产生抗药菌就会被杀死,所以这种耐药性就会消失.
鞠缸咱3963病毒性肺炎只用抗生素能治疗好吗 - 寻医问药网 - xywy.com
文甘关18679894060 ______ 抗生素只能用于治疗细菌性肺炎对病毒性肺炎没有效果对于病毒性肺炎应该使用抗病毒药物进行治疗这样才能痊愈