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buffer+pw

来源:baiyundou.net   日期:2024-09-26

DNA 凝胶回收试剂盒

产品简介:

DNA 凝胶回收试剂盒(DNA Gel Extraction Kit),是一种用于从 DNA琼脂糖凝胶中回收目的 DNA 的试剂盒。本试剂盒采用优化的缓冲体系和可高效、专一性吸附 DNA 的硅胶柱,从 TAE 或 TBE 琼脂糖凝胶中回收 DNA 片段,通过离心力或者负压让含有核酸的溶液通过硅胶膜,使核酸在特定溶液环境中吸附在硅胶膜上,经过洗涤、洗脱等步骤得到纯的核酸。纯化的 DNA 可直接用于连接、转化、酶切、PCR、 测序、文库筛选等分子生物学研究。

产品内容:

 

储存条件:

使用前请先在漂洗液 Buffer PW 中加入 12 mL 无水乙醇。

1.将单一的目的 DNA 条带从琼脂糖凝胶中切下(尽量切除多余部分)放入干净的离心管中,称取凝胶重量(去除空管重量),100 mg凝胶等同于 100 μL 体积,作为一个凝胶体积。

注:若回收的 DNA 片段用于克隆,须避免紫外照射损伤 DNA。尽量减少紫外暴露时间。

2.向胶块中加入 1 倍体积 Buffer PE(如果凝胶重为 0.1 g,则加入100 µL Buffer PE)。50-60℃水浴溶胶 5-10 min,期间温和地上下翻转离心管,以确保胶块充分溶解。(若胶块的体积过大,可事先将胶块切成碎块。)

3.将上一步所得溶液加入一个吸附柱中,室温放置 1 min,12,000rpm 离心 1 min,弃废液,将吸附柱放回收集管中。

注:吸附柱的容量为 750 µL,若上步得到的溶液大于 750 µL,可分批加入。

4.在吸附柱中加入 300 µL Buffer PE,12,000 rpm 离心 1 min,弃废液,将吸附柱放回收集管中。

5.在吸附柱中加入 700 µL Buffer PW(确认已加入无水乙醇),12,000 rpm 离心 1 min,弃废液,将吸附柱放回收集管中。

6.重复一次步骤 5。

7.吸附柱放回收集管后,12,000 rpm 离心 2 min,尽量除尽漂洗液。

注意:可将吸附柱置于室温放置数分钟,以防止残留的乙醇影响后续的酶反应(酶切、PCR 等)实验。

8.将吸附柱放入干净的 1.5 mL 离心管中,开盖室温静置 5 min。向吸附膜中间位置加入 30 µL Buffer PB 或 ddH2O(洗脱液应先放置于水浴锅中预热) ,室温放置 2 min,12,000 rpm 离心 2 min,收集DNA 溶液。

注意:洗脱体积不应小于 30 μl,体积过少影响回收效率。为了提高 DNA 的回收量,可将离心得到的溶液重新加回离心吸附柱中,12,000 rpm 离心 2 min,将DNA 溶液收集到离心管中。回收大于 3 KB 的片段时,建议将 Buffer PB 预热至55 ℃以提升回收效率。DNA 也可以用 ddH2O 洗脱。DNA 产物应保存在-20℃,以防 DNA 降解。


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幸朋波5216VHDL中的buffer是什么意思,在什么情况下用它定义呢 -
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(编辑:自媒体)
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