cacl2是沉淀

细胞经过一些特殊方法（电击法、CaCl2 法）等处理后，细胞膜的通透性发生了暂时性的改 变，成为能允许外源 DNA 分子进入的细胞，即感受态细胞（Compenent cells）。

1 实验方法原理：

带有外源 DNA 的重组质粒，在体外构建后，导入宿主细胞，随着细胞的大量复制、繁殖， 才能够有机会获得纯的重组质粒 DNA，该过程称之为转化过程。受体细胞经过一些特殊方 法（如：CaCl2，RuCl 等化学试剂）的处理后，细胞膜的通透性发生变化，能容许外源 DNA 的载体分子通过。

2 实验材料、试剂、仪器耗材：

E. coli DH5α 菌株

LB 固体培养基、LB 液体培养基、CaCl2、硫酸镁、SOB、TFB 等 培养皿、恒温摇床、聚丙烯管、电热恒温培养箱、台式高速离心机、无菌工作台、烧瓶、恒 温水浴锅、低温冰箱、制冰机、分光光度计、微量移液枪、锥形瓶、试管等

3 实验步骤：

1、从 37℃培养 16-20 h 的平板中挑取一个单菌落(直径 2-3 mm)，转到一个含有 100 ml LB 或 SOB 培养基的 1L 烧瓶中。于 37℃剧烈振摇培养 3 h。一般经验，1 OD600 约含有大肠 杆菌 DH5α 109 个/mL。

2、将细菌转移到一个无菌、一次性使用的、用冰预冷的 50 ml 聚丙烯管中，在冰上放置10 min，使培养物冷却至 0℃。

3、于 4℃用 Sorvall GS3 特头（或与之相当的转头）以 4 100 r/min 离心 10 min，以回收 细胞。

4、倒出培养液，将管倒置 1 min 以使最后的痕量培养液流尽。

5、每 50 ml 初始培养液用 30 ml 预冷的 0.1 mol/LCaCl2-MgCl2 溶液(80 mmol/L MgCl2，20 mmol/L CaCl2)重悬每份细胞沉淀。

6、于 4 ℃用 Sorvall GS3 转头（或与之相当的转头）以 41 00 r/min 离心 10 min，以回 收细胞。

7、倒出培养液，将管倒置 1 min 以使最后的痕量培养液流尽。

8、每 50 ml 初始培养物用 2 ml 用冰预冷的 0.1 mol/L CaCl2(或 TFB)重悬每份细胞沉淀。

9、此时，可以用新鲜制备的感受态细胞直接做转化实验，也可以将细胞冻存于-  70℃。

4 注意事项：

1. 为达到高效转化，活细胞数务必少于 10 8 个细胞/mL，对于大多散大脑杆菌来说，这相 当于 OD 值为 0.4 左右。为保证细菌培养物的生长密度不致过高，可每隔 15-20 min 测定 OD600 值来监测，用监测的时间及 OD 值列一个图表，以便预测培养物的 OD600 值到 0.4 的时间，当 OD600 值达到 0.35 时，收获细菌培养物。

2. 在菌株与菌株之间，OD 值与每毫升中活细胞散间的关系变化很大，因此有必要通过漶 量特定脑杆菌的生长培养物在生长周期的不同时相的 OD600 值，并将各稀释维度的培养物 铺于无抗生素的 LB 琼脂板以计算每一时相的活细胞散，从而使分光光度计读数得到标准化。 3. 对大多数大肠杆菌（MC106 除外），采用 TFB 代替 CaCl2 可得到相同或更好的结果。 Dagert 和 Ehrlieh 的实验(1979)曾表明，细胞可以于 4℃在 CaCl2 溶液中保存 24-48 h， 在贮存的最初 12-24 h 内，转化率增加 4-6 倍，然后降低到初始水平。

4. 克隆的新鲜程度，一定要选新鲜平板的单克隆，即刚涂布生长过夜的平板。

5. 菌体的 OD600 值，JM109 或 BL21，OD 值为 0.35，DH5α 为 0.4，要尽量保证 OD值不要过高，更不能超过 0.6。

6. 低温处理的时间，做完后冰上保存 12-24 h 后分装，并保存于-80℃。

7.   试剂和用品，所有的用品（离心管、药瓶等）用新的，如果使用旧的，要确保干净，CaCl2溶液。

叔昏褚3590将过量CO2分别通入下列几种溶液,最终有沉淀生成的是CaCL2溶液 NaSiO3溶液 Ca(CLO)2溶液 饱和碳酸钠溶液 -
政兰家13954161914 ______[答案] Na2SiO3溶液和饱和碳酸钠溶液 1.CaCL2溶液和CO2不反应. 2.Na2SiO3+ 2CO2(过量)+2H2O = H2SiO3(沉淀) + 2NaHCO3 3.Ca(ClO)2 + 2CO2(过量)+2H2O = Ca(HCO3)2 + 2HClO 4.Na2CO3+ CO2+ H2O = 2NaHCO3 (沉淀)

叔昏褚3590氢氧化钠与碳酸氢钠反应是否有成淀?CaCl2与氢氧化钠反应是否有沉淀? -
政兰家13954161914 ______[答案] 是碱和酸式盐的反应 方程式是NaOH+NaHCO3===Na2CO3+H2O

叔昏褚3590在CaCl2溶液中通入CO2气体,会产生沉淀吗?CO2会先和溶液中的水反应,生成碳酸,再和CaCl2反应,生成CaCO3沉淀吗? -
政兰家13954161914 ______[答案] 有个叫“强酸制弱酸”的说法.碳酸是弱酸,不能制出盐酸. 再说,即使能反应,碳酸与氯化钙生成碳酸钙和盐酸,盐酸又和碳酸钙反应了,不就又回去了!

叔昏褚3590澄清石灰水通co2为什么有沉淀,沉淀又消失,通cacl2溶液呢 -
政兰家13954161914 ______[答案] 通入SO2先变浑浊,因为生成亚硫酸钙(不溶),然后由于亚硫酸钙太多,又继续反应生成亚硫酸氢钙(可溶),又变澄清.Ca(OH)2+SO2=CaSO3沉淀+H2O Ca(OH)2+SO2=Ca(HSO3)2 CO2的原理与此类似.先生成碳酸钙CaCO3,再生成碳酸氢钙...

叔昏褚3590硫酸钠溶液与氯化钙溶液混合 会反应吗若反应 生成的硫酸钙是微溶的 算沉淀吗是不是所有的微溶物质都能看成是沉淀还是? -
政兰家13954161914 ______[答案] 会反应.Na2SO4+CaCl2=2NaCl+CaSO4(沉淀符号) 微溶物在反应中作为可溶物,而在生成物中看成是不溶于水的,看成沉淀就好了,所以可以在生成物中要加沉淀符号 .初中所学的微溶物主要有氢氧化钙、硫酸钙、硫酸银、碳酸镁,都看成沉淀物.

叔昏褚3590SO2气体通入CaCl2溶液,有沉淀生成吗?同上为什么?CaSO3不是沉淀吗? -
政兰家13954161914 ______[答案] 假如能生成沉淀,那么反应应该是SO2+CaCl2+H2O==CaSO3+2HCl这将是一个弱酸制强酸过程,但是CaSO3不是像BaSO4,AgCl那样即不溶于酸,也不溶于水的沉淀,而且不满足复分解反应发生的条件,因为HCl可与CaSO3反应掉(反过来可以...

叔昏褚3590化学有关沉淀如果我在饱和CaCl2溶液中加入过氧化钠会不会有沉淀?为什么?氢氧化钙是微溶,但是钙离子有大大过量?不是有澄清石灰水吗? -
政兰家13954161914 ______[答案] 会的,过氧化钠溶于水生成的氢氧根去和钙离子反应生成了微溶的氢氧化钙,减小了离子浓度.更因为是饱和的氯化钙溶液,所以氢氧化钙沉淀比较明显.

叔昏褚3590在下列溶液中通入过量的CO2气体,最终一定有沉淀产生的组合是( )①NaAlO2溶液 ②CaCl2溶液 ③NaOH溶 -
政兰家13954161914 ______ ①碳酸酸性大于氢氧化铝,将二氧化碳通到偏铝酸钠的溶液中,会产生氢氧化铝白色沉淀,故①正确;②向CaCl2溶液中通入少量的CO2不会发生反应,无沉淀出现,故②错误;③二氧化碳与氢氧化钠反应生成碳酸氢钠,溶于水,没有生成生成,故③错误;④向Ca(OH)2溶液中通入过量CO2会生成易溶于水的碳酸氢钙,没有沉淀,故④错误;⑤饱和碳酸钠溶液和二氧化碳反应生成碳酸氢钠,由于碳酸氢钠溶解度比碳酸钠小,则生成沉淀,故⑤正确. 故选A.

叔昏褚3590H2CO3能和CaCl2反应吗?H2CO3能和CaCl2反应吗?有人说能,因为是复分解反应,反应生成了CaCO3沉淀.也有人说不能反应,因为H2CO3是弱酸,而... -
政兰家13954161914 ______[答案] 不能,我们先假设能反应,产物是碳酸钙和盐酸.但是这有个矛盾.虽然产生了沉淀,但是产物里面有盐酸,而盐酸是强酸,碳酸是弱酸,怎么能用弱酸制得强酸?所以不会反应.

叔昏褚3590为什么NaHCO3溶液滴入CaCl2溶液会产生白色沉淀 -
政兰家13954161914 ______ 不会产生沉淀