ddh2o是什么水
将收集的各样品加入等体积的 2×SDS-PAGE Loading Buffer，煮沸裂解 5min，冰浴 2min，12,000rpm 离心 10min，取上清-20℃保存备用。
SDS-PAGE 蛋白质电泳（参照分子克隆实验指南操作）(萨姆布鲁克,2002)
1）按照电泳装置的使用说明，装好洁净干燥的玻璃板。
2）分离胶的制备
按下列成分配制10mL 12%分离胶：
ddH2O 30%丙烯酰胺混合液 1.5M Tris(pH8.8) 10%SDS 10%过硫酸铵 TEMED | 3.3 mL 4.0 mL 2.5 mL 0.1 mL 0.1 mL 0.004 mL |
总体积 | 10 mL |
各成分加入后迅速旋涡混匀，用微量移液器将其小心地注入准备好的玻璃板间隙中，并为积层胶留出足够空间。轻轻在顶层加入一薄层水封顶，以防止空气中的氧对凝胶聚合的 抑制作用。凝胶聚合完成后，倒掉覆盖的水层，用水清洗凝胶顶部数次，用滤纸吸干凝胶顶 端的水。
3）积层胶的制备
按下列成分配制2mL 5%的积层胶：
ddH2O 30%丙烯酰胺混合液 1.0M Tris(pH6.8) 10%SDS 10%过硫酸铵 TEMED | 1.4mL 0.33mL 0.25mL 0.02mL 0.02mL 0.002mL |
总体积 | 2mL |
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各成分加入后迅速旋涡混匀，用微量移液器将其灌注到分离胶上，灌满后小心插入加样梳，尽可能避免产生气泡。
4）待积层胶凝固后，小心拔下梳子。
5）将凝胶固定于电泳装置上，加入足量的1×Tris-甘氨酸电泳缓冲液，在加样孔中分 别加入20μL各样品。
6）样品在积层胶中电泳时，使用80V电压，待溴酚蓝带进入分离胶后，将电压升至120V，继续电泳直至溴酚蓝带到达分离胶的底部且开始泳出胶底面，关闭电源。
7）卸下凝胶，将其浸泡在至少5倍体积的考马斯亮蓝R-250染色液中，置水平摇床上 室温染色至少4h，之后取出染色的凝胶并回收染液，以备再用，将凝胶浸泡于考马斯亮蓝 脱色液中，在水平摇床上脱色4~8h，其间更换脱色液3~4次，直至凝胶脱色到条带清晰为 止，观察记录结果并拍照。
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阳澜荆4491PCR实验生理盐水能否代替纯化水 -
叔饼依19356225302 ______ 不可以 1、生理盐水就是NaCl的水溶液 所以里面会有Na离子和Cl离子 2、PCR过程中只需要Mg离子 其他的所有都是多余的 3、所以使用水的时候也只能使用去离子水,既ddH2O,否则对PCR结果会有干扰 4、具体有什么干扰 可能是条带不清晰(产量少)甚至有些比较长链的DNA本来就不好P 会直接P不出来
阳澜荆4491干粉引物怎么稀释到工作液 -
叔饼依19356225302 ______ 干粉引物怎么稀释到工作液 在实际操作时,你首先需要进行离心.离心前请不要打开盖子. 离心后,在离心管底可见白色沉淀,这时你可根据合成单上的说明,加入适量的ddH2O或者Elution Buffer.合成单上标有Tm值,OD值以及引物长度等.通常,会有1OD=?ug的标记(由于引物长度不同,此处数值也对应不同),直接按?值加入等量ddH2O(如20ug对应加入20ul水)便可稀释为1ug/ul 最后充分涡旋,使沉淀完全溶解. -20度保存,使用时,应稀释10倍.
阳澜荆4491请问引物是怎么稀释的? -
叔饼依19356225302 ______[答案] 上面网友讲的估计应该会出现在你合成的引物单上. 在实际操作时,你首先需要进行离心.离心前请不要打开盖子. 离心后,在离心管底可见白色沉淀,这时你可根据合成单上的说明,加入适量的ddH2O或者Elution Buffer.合成单上标有Tm值,OD值以...
阳澜荆4491...溶液大部分蒸发了,按理说体积小于30uL不能送去测序,PCR失败,我能不能往里面加ddH2O?水蒸发后里面还有目的基因吗?我能不能加水呢?为什么? -
叔饼依19356225302 ______[答案] 目的基因可能有,但是不会很多.可以加水,但是好像没有必要啊. PCR过程中水量大部分蒸发后反应体系中的各成分的浓度... 所以有可能你目的基因扩增的量很少,或者根本没有.我不明白你加水做什么用的?测序其实是要求目的基因在某一浓度之上...
阳澜荆4491pcr缓冲液中各成分的作用是什么?是缓冲液中各成分的作用,不是缓冲液的作用, -
叔饼依19356225302 ______[答案] 基本常识 PCR包括7种基本成分:模板DNA、特异性引物、热稳定DNA聚合酶、脱氧核苷三磷酸(dNTP)、二价阳离子、... ddH2O 800mL;HCl 49mL 三者混匀充分溶解后,滴加浓盐酸调pH至8.0,定溶至1000mL 0.01mol/L Tris-Cl(1000mL) Tris碱 ...
阳澜荆4491酶切反应中的灭菌水是灭菌的三蒸水吗?若不对,是什么呢?
叔饼依19356225302 ______ 双蒸水就可以啦 其实高纯水也可以了
阳澜荆4491提取DNA时为什么要对耗材灭菌? -
叔饼依19356225302 ______ 灭菌的目的是为了防止菌体DNA的污染,当然也只是排除了耗材来源的外来菌种污染而已,空气中还有材料本身所带的菌种是无法去除的,那么问题的关键就在于你拿到目的基因组的下游要进行什么操作了,如果污染对下游没有影响,那么灭不...
阳澜荆4491关于溶解定义的疑问 -
叔饼依19356225302 ______ 一种物质(溶质)溶于一种溶剂中.你先要判断溶质是否与溶剂发生反应.若不发生反应,如NaCL,则改溶液还是称为氯化钠溶液,但若发生反应,如SO3溶与水就生成了H2SO4.既可以说是SO3的水溶液,也可以说是硫酸溶液. 溶解你也说了是一个过程,书上并没有定义他是否属于那种变化.你看他属于什么变化,关键看你所用的溶质是不是和溶剂发生反应了. 书后面的溶解性表是指那些物质溶于水,表的底下有说明啊.!!难道你们现在课本没有? 说明:“溶”表示那种物质可溶于水,“不”表示不溶于水,“微”表示微溶于水.“挥”表示挥发性.“—”表示那种物质不纯在或遇到水就分解了
阳澜荆4491为什么说D2O和H2O是同种物质? -
叔饼依19356225302 ______ 化学反应中最小粒子是原子,并且决定化学性质的粒子是分子. 然而H2O与D2O的差别是在原子内部的,H和D作为同位素,H2O和D2O化学性质完全相同,也就是说是物理意义上有差别.我们从来就没有定义说物理性质不同就不是同种物质,例如我们说冰和水都是H2O,在化学反应方面它们是完全相同的. 我们平时常提到同位素示踪法,实则利用的就是它们在化学意义上的相同性.
阳澜荆4491高压灭菌过的水是rnaase free的吗 -
叔饼依19356225302 ______ nuclease-free reagent 无核酸酶试剂 例句 nuclease free reagent 无核酸酶试剂 Reading occupies most of my free time. 阅读占去了我大部分的闲暇时间.