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dna复制模板去向

来源:baiyundou.net   日期:2024-09-25

一、PCR分子诊断技术

在全球医疗器械行业中,体外诊断是占比最高的细分领域之一,根据诊断原理的不同,体外诊断产品分为分子诊断、免疫诊断、生化诊断等多种类型。其中,分子诊断的灵敏度、特异性、准确性等均较为突出,尤其是在新冠肺炎疫情全球蔓延的大背景下,以PCR为代表的分子诊断技术得到了加速发展。

PCR,即聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)的英文缩写,是一种以DNA双链复制原理为基础,对特定核酸样本进行体外扩增的生物技术,能够将微量的核酸样本迅速拷贝至几百万倍,便于后续的分析研究。该技术源起于20世纪70、80年代,经过几十年的发展,经历了初代传统PCR、第二代荧光定量PCR和第三代数字PCR的演变,在医疗筛查诊断、生命科学基础研究、法医分析鉴定及食品卫生和环境检测等方面得到广泛应用。

1.荧光定量PCR

实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR)技术,简称qPCR,是在PCR反应体系中加入荧光物质(荧光染料或荧光标记的特异性探针),利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。

与普通PCR相比,实时荧光定量PCR技术是一次由定性技术向定量技术的飞跃。运用该项技术,可以对DNA、RNA样品进行相对定量、定量和定性分析。

(图:荧光定量PCR实验过程)

2.数字PCR

数字PCR即Digital PCR(dPCR),它是一种核酸分子绝对定量技术。相较于qPCR,数字PCR可让你能够直接数出DNA分子的个数,是对起始样品的绝对定量。PCR实际上是一个在模板DNA、引物(模板片段两端的已知序列)和四种脱氧核苷酸等存在的情况下,DNA聚合酶依赖的酶促合成反应,扩增的特异性取决于引物与模板DNA的特异结合。      

(图:数字PCR技术原理)

根据微反应单元的不同形式,数字PCR产品可分为微板式、微滴式和芯片式等。目前,市场上主要的数字PCR产品主要是基于微滴式和芯片式。

三代核酸检测技术对比:

技术方法

概念

技术优势

技术劣势

传统PCR

采用普通PCR扩增仪扩增靶基因,通过琼脂糖凝胶电泳对产物进行定性分析

1.可实现特定核酸片段的体外复制

1.相关核酸染料对操作人员和环境具有危害

2.易出现假阳性结果

3.耗时时间长、操作复杂

4.无法准确定量

荧光定量PCR

是一种在DNA扩增反应中,以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析。

1.污染风险低

2.操作流程更简单、经济高效

3.样品加样量少

1.不同厂家生产的试剂和设备之间的差异对检测结果影响较大,不具备可比性

2.存在背景值的影响,结果易产生偏差

3.低拷贝的DNA难以检测

4.受PCR抑制物的影响较大

数字PCR

将核酸样品分配到大量独立、平行的微反应单元(纳升级)中,部分反应单元包含靶标分子(阳性),而其他不包含(阴性),接着进行扩增,并利用TaqMan化学试剂或染料标记探针检测靶标序列,能够实现靶标分子的绝对计数。

1.特异性强、灵敏度高

2.绝对定量,准确性好

3.抗干扰能力强

1.仪器设备和试剂昂贵、操作复杂

2.检测时间长、成本较高、检测范围较窄

二、光学原理解决方案
1.荧光定量PCR

 

 

(图:荧光定量PCR光路图)

 

(图:荧光定量PCR光谱)

2.数字PCR


(图:数字PCR光路图)

 

(图:数字PCR光谱)

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仇妍庆3647DNA复制( ) -
韶葛樊18020053530 ______[选项] A. 以DNA的一条链为模板 B. 以4种游离的核糖核苷酸为原料 C. 需要解旋酶和DNA聚合酶催化 D. 将亲代的密码子传给子代

仇妍庆3647DNA复制以一条还是两条链为模板 -
韶葛樊18020053530 ______[答案] DNA 复制时“半保留复制”,边解旋边复制,过程是DNA双链解开,各自与脱氧核苷酸结合,形成新的DNA分子.所以DNA复制以两条链各自为模板.

仇妍庆3647DNA聚合酶 ,以DNA为复制模板,从将DNA由5'端点开始复制到3'端的酶"将DNA由5'端点开始复制到3'端的酶"是什么意思? -
韶葛樊18020053530 ______[答案] 就是说,DNA聚合酶是沿着DNA的单链移动,从5'向3'端合成新的DNA链.

仇妍庆3647DNA分子复制的模板和原料分别是( ) -
韶葛樊18020053530 ______[选项] A. DNA、脱氧核苷酸 B. RNA、脱氧核苷酸 C. DNA、核糖核苷酸 D. RNA、脱糖核苷酸

仇妍庆3647dna复制中需要的原料是什么dna链延伸的方向又是什么 -
韶葛樊18020053530 ______ DNA复制需要的原料包括DNA模板,脱氧核糖核苷酸,酶,离子;延伸方向是5'端到3'端

仇妍庆3647DNA复制的方向是什么? -
韶葛樊18020053530 ______ 多起点或者单起点,双向复制

仇妍庆3647下列关于细胞内DN -
韶葛樊18020053530 ______[选项] A. 聚合酶与RNA聚合酶作用相同点的叙述中,不正确的是( )A、都以DNA分子链为模板 B. 通过形成磷酸二酯键逐个连接上核苷酸 C. 两者发挥作用的场所相同 D. 两者催化合成的产物的去向完全相同

仇妍庆3647DNA复制的场所
韶葛樊18020053530 ______ 细胞核内

仇妍庆3647简述DNA的复制过程. -
韶葛樊18020053530 ______ 1)解旋:DNA双链氢键断裂,双链分开; 2)复制:以各自双链为模板,进行复制; 3)分配:新复制的核苷酸链与原来的一条核苷酸链按照碱基配对原则形成新的双链结构并分给子代.

仇妍庆3647DNA复制时子链延伸方向为什么是5'到3' -
韶葛樊18020053530 ______ DNA复制时子链延伸方向为什么是5'到3' DNA复制的最主要特点是半保留复制,另外,它还是半不连续复制(Semi-ondisctinuous replication).DNA双螺旋的两条链是反向平行的,因此,在复制起点处两条DNA链解开成单链时,一条是5'...

(编辑:自媒体)
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