dna提取实验中sds的作用

磁珠质粒提取试剂盒

产品简介：

采用优化的 SDS-碱裂解法裂解细胞，高效去除抑制物等杂质，羟基磁珠能在高盐、低 pH

值状态下与溶液中的核酸通过疏水作用、氢键作用和静电作用等发生特异性结合，而不与其

他杂质（蛋白质）结合，迅速从样品中分离质粒 DNA。纯化的质粒 DNA 可直接用于酶切、

PCR、测序、连接、转化、转染一些常规的传代细胞等生物学实验。

产品内容：

储存条件：

RNase A，-30 ~ -15 ℃保存，干冰运输；

羟基磁珠 2 ~ 8 ℃保存，室温运输；

其他组分 15 ~ 25 ℃保存，室温运输。

使用步骤：

1、取 5-10 mL 过夜培养菌液加入离心管中，12000 rpm 离心 2 min 收集菌体沉淀，尽量吸弃

上清。

2、向留有菌体沉淀的离心管中加入 250 μL Buffer P1（已加入 RNase A），使用移液枪或涡

旋振荡器充分混匀，悬浮菌体沉淀，确保无菌块。37 ℃静置 15 min，以除去 RNA。

3、向离心管中加入 250 μL Buffer P2，温和上下颠倒混匀 4-6 次，充分混匀使菌体裂解，此

时溶液应变得清亮粘稠。

注意：温和地混匀，不要剧烈震荡，以免打断基因组 DNA。所用时间不应超过 5 min，以免质粒受到破坏。

4、向离心管中加入 350 μL Buffer P3，立即温和上下颠倒混匀 8-10 次，充分混匀，此时应

出现白色絮状沉淀，12000 rpm 离心 10 min。

注意：P3 加入后立即混合，避免产生局部沉淀。如果离心完仍有沉淀漂浮，可延长离心时间取上清。

5、将步骤 4 中的上清液转移到新的 2 mL 灭菌离心管中，加入等体积异丙醇，混匀，加入50 μL 羟基磁珠，颠倒混匀 1 min，室温放置 2 min。

6、将步骤 5 中的离心管放在磁力架上静置，磁珠完全吸附后，小心吸去液体。

7、将离心管从将离心管从磁力架上取下，加入 600 μL Buffer PW（请确认是否加入无水乙

醇），混匀 2 min。

注意：加入漂洗液 PW 后，室温静置 2 min，有助于更好的去除杂质。

8、将离心管放置于磁力架上静置，磁珠完全吸附后，小心吸去液体。

9、将离心管从磁力架上取下，加入 600 μL Buffer PW，混匀 2 min。

10、将离心管放置于磁力架上静置，磁珠完全吸附后，弃废液，吸尽管底管盖的液体。

11、将离心管置于磁力架上，室温晾干 15 min。

注意：乙醇残留会抑制后续的酶反应，所以晾干时要确保乙醇挥发干净。但也不要干燥太长时间，以免难

以洗脱质粒 DNA。

12、将离心管从磁力架上取下，加入 100-200 μL 洗脱缓冲液 TB 或 ddH2O（洗脱液可在水浴

锅中预热），振荡混匀，置于 56 ℃水浴锅中，孵育 10 min，期间每隔 2 min 颠倒混匀。

13、将离心管放置于磁力架上，磁珠完全吸附后，小心将质粒 DNA 溶液转移至一个新离心

管中，并于-20℃保存。

注意事项：

1、使用前请短暂离心 RNase A，将试剂盒提供的 RNase A 溶液全部加入 Buffer P1 中，置于

4℃保存。

2、羟基磁珠置于 4℃保存，振荡混匀后再使用。

3、首次使用前按 Buffer PW 瓶子标签所示，加入适量的无水乙醇稀释 Buffer PW，于室温保

存。

4、若低温保存时，Buffer P2 和 Buffer P3 溶液容易产生白色沉淀，使用前可室温放置一段时

间，必要时可在 37℃水浴锅中预热至沉淀完全溶解，混匀后再使用。

5、处理低拷贝质粒时，提高菌液的用量，并按比例扩大 Buffer P1、Buffer P2 和 Buffer P3

的用量。

6、使用 Buffer P2、Buffer P3 和 Buffer PD 应戴手套，使用后应立即盖紧盖子。

7、自备试剂：异丙醇、乙醇。

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