flag标签纯化蛋白

宰贞薛4140求助蛋白表达中的his标签的作用 -
桑友健18054682979 ______ his标签蛋白就是:六个组氨酸.一般存在于重组蛋白氮端或碳端,便于纯化该重组蛋白,组氨酸可以特异性的结合镍离子,带有组氨酸标签的重组蛋白可以被镍柱吸附,从而达到纯化的目的.也就是在表达载体上面,特别加六个组氨酸的碱基序列,目的就是纯化.…………………… ……………………………… 更多具体材料请参考: 蛋白表达 http://product.bio1000.com/100182/

宰贞薛4140重组的蛋白中有较多的载体蛋白会影响免疫结果么 -
桑友健18054682979 ______ 重组蛋白的话,一般在蛋白冻干或最终制得之前,都会进行纯化,一般的生物公司可以纯化纯度到达90%,就是不会有其他的杂蛋白存在.做抗体或者抗原等都不会对免疫有影响的,如有你的里面其他杂蛋白多的话,建议先做蛋白纯化(亲和纯化,分子筛都可,一般的亲和纯化,带有his标签或者GST标签都可到达最少85%以上的纯度) 提供亲和纯化相关资料:http://wenku.baidu.com/view/ef8f3831f8c75fbfc67db276 如有帮助,请采纳,谢谢~

宰贞薛4140标签抗体的介绍 -
桑友健18054682979 ______ 标签抗体,别名为抗原表位,又称抗原决定簇,是抗原分子中决定抗原特异性的特殊区域或基团,是与抗体特异性结合的结构或序列.

宰贞薛4140如何构建一个蛋白基因的表达载体 -
桑友健18054682979 ______ 构建表达载体首先取决于你的实验目的,例如你的实验是否要求你的蛋白表达出来必须可溶性蛋白,载体上面的标签决定了你的纯化方法,当然也决定了实验成本,等等一系列需求. 拿带标签的载体为例,因为带标签后可以增加蛋白质的可溶性,也为纯化带来了方便,一般都会采用.标签一般都是在目的蛋白的N端,这样就需要考虑读码框的问题,一定要与前面的读码框保持一致. 利用酶切连接的方法连入目的载体这个应该都知道,或者用gateway系统,非常方便,我就经常用gateway载体,构建起来速度呼呼的. 基本就是这些了吧,主要就考虑选择什么标签和读码框别错了. 有什么问题可以直接发信给我

宰贞薛4140FLAG标签 什么意思 -
桑友健18054682979 ______ 你是说分子实验吗 做细胞定位时会用到 它是插入目的质粒的一段DNA序列 转染到细胞后 可以表达出与接下来的抗体结合的蛋白(也可以说是 抗原)然后就可以通过免疫荧光方法检测到目的蛋白的表达位置

宰贞薛4140含flag标签的融合蛋白在细胞内如何定位 -
桑友健18054682979 ______ flag标签一般不影响细胞定位的,这个蛋白本身的细胞定位是哪里,融合之后还是哪里啊.

宰贞薛4140蛋白质的提取中如何确定目的蛋白? -
桑友健18054682979 ______ 做分子量大小鉴定 ,质谱就可以做精密分子量分析.PAGE预测分子量存在很大差异,再一方面,western blotting具有不可重复性,效果不好,我做过.希望帮到你.

宰贞薛4140基因与flag融合表达会影响基因功能吗 -
桑友健18054682979 ______ 能够判断目的基因的转染效率 2.能够对目的蛋白的表达进行定量,比如通过测定荧光强度转化为量化值,间接反应目的蛋白表达的强度 3.由于PEGFP质粒带有筛选标志,还可以进行稳定转染的筛选,标记上荧光,有利于稳定转染的筛选. 我个人认为1和3没有什么问题,但对2来说 我认为最好用WESTERN来定量,用GFP的抗体就可以. MYC,HIS6,除了用作亲和纯化的标记,还可标记目的蛋白,由于他们很小,不会干扰目的蛋白的活性,不象GFP200多AA,所以有人在构建时常在目的基因和GFP 之间添加连接肽,以免目的蛋白与GFP相互影响.

宰贞薛4140GST标签蛋白的纯化,目的蛋白在GST标签切除后的浓缩、纯化(离子交换和分子筛)过程中出现了聚集和降解. -
桑友健18054682979 ______ gst-tag切除后直接过一个gst柱,tag就挂柱上了,目标蛋白就在穿透里了.如果带着标签纯化的话,过离子柱不是还要摸索条件吗,而且分子筛的纯化量很低.建议先过gst柱,然后柱上酶切掉标签,这样穿透里就会是目标蛋白,也不容易发生聚集啥的