folin酚试剂法改进
本实验室应用的Folin-酚试剂为北京某某昌盛生物技术有限公司生产，效果尚可，该公司生产的BCA蛋白定量试剂盒比Folin-酚试剂检测更精确，且不受绝大部分样品中的化学物质的影响，对于蛋白纯化样本含量测定来说更加适合。
1、Folin-酚法（Lowry法）原理：
这种蛋白质测定法是最灵敏的方法之一。Folin—酚试剂中的磷钼酸盐—磷钨酸盐被蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基还原，产生深蓝色（钼蓝和钨蓝的混合物）。在一定的条件下，蓝色深度与蛋白的量成正比。
2、技术指标：
本试剂盒可测定蛋白浓度0.05--1mg/ml。当蛋白浓度范围在0.05-0.5mg/ml范围时，线性关系最好。标准曲线相关系数：R2大于0.99.
3、试剂盒组分：
1.Folin—酚试剂甲
溶液I：2g无水碳酸钠和20mg酒石酸钠溶于100ml 0.2mol/l氢氧化钠中（已配制成5×，用时稀释5倍，使用完需另配)。
溶液Ⅱ：0.5g五水硫酸铜溶于100ml水溶液。
将稀释后的溶液I与溶液Ⅱ，以50：1的比例混合，混合后即为Folin—酚试剂甲，此试剂只能用一天，过期失效。
2.Folin—酚试剂乙
原液浓度为2moL/L使用前需稀释一倍，用多少稀释多少。使其最后浓度为1moL/L。此为Folin—酚试剂乙应用液。Folin—酚试剂乙原液平时应密封贮存于4℃冰箱中避光保存。
4、操作方法：
标准曲线的制作
取14支试管分成两组，按下表顺序加入试剂，混匀，于室温放置10分钟。再加入0.5毫升试剂乙，立即摇匀，在室温放置30分钟，然后于500nm处比色。测定光密度值。取两组测定的平均值，以蛋白质浓度为横座标，光密度值为纵座标，绘制标准曲线为定量的依据。
试剂/管号 | 0 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
BSA/ml(250ug/ml | 0 | 0.1 | 0.2 | 0.4 | 0.6 | 0.8 | 1.0 |
蒸馏水/ml | 1.0 | 0.9 | 0.8 | 0.6 | 0.4 | 0.2 | 0 |
试剂甲/ml | 5 | 5 | 5 | 5 | 5 | 5 | 5 |
试剂乙/ml | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
样品测定：
（1）取1毫升样品溶液（约含20-250微克多肽或蛋白质）加入5毫升试剂甲混匀，于室温放置10分钟。
（2）加入0.5毫升试剂乙（folin—酚），立即摇匀，于室温保温30分钟；然后500nm（根据使用情况）处比色，以1毫升水代替样品作空白对照。测定后，可以从标准曲线中查出未知样品浓度。
若用0.5厘米光程的比色杯进行比色，可按下面方法进行操作：取0.2毫升样品溶液（约含5-100微克多肽或蛋白质），加入1毫升试剂甲（可选用0.3-0.5厘米直径的小试管）混匀，10分钟以后，再加入0.1毫升试剂乙，立即混匀，30分钟后比色，一般来说，若多肽或蛋白质浓度在2-25微克，则采用波长755nm,而25微克以上则采用500nm比色为宜（波长选择依使用情况）。
样本1 | 样本2 | 样本3 | ||||||||
试剂/管号 | 0 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 |
BSA/ml(250ug/ml)或样本 | 0 | 0.02 | 0.04 | 0.08 | 0.12 | 0.16 | 0.2 | 0.2 | 0.2 | 0.2 |
蒸馏水/ml | 0.2 | 0.18 | 0.16 | 0.12 | 0.08 | 0.04 | 0 | 0 | 0 | 0 |
试剂甲/ml | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 |
试剂乙/ml | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 |
测值1 | ||||||||||
测值2 | ||||||||||
计算Pr= | ||||||||||
紫外分光光度计测Pr= |
500nm波长
李怖胆1897Folin - 酚试剂法测定蛋白质含量为什么比双缩脲法灵敏? -
洪彭师15620119371 ______ Folin—酚试剂法最早是由Lowry确定的测定蛋白质浓度的基本方法.以后在生物化学领域得到广泛的应用.此法的显色原理与双缩脲方法是相同的,只是加入了第二种试剂,即Folin—酚试剂,以增加显色量,从而提高了检测蛋白质的灵敏度. Folin—酚试剂由甲试剂和乙试剂组成.甲试剂由碳酸钠,氢氧化钠,硫酸铜及酒石酸钾钠组成.蛋白质中的肽键在碱性条件下,与酒石酸钾钠铜盐溶液起作用,生成紫红色络合物.乙试剂是由磷钼酸和磷钨酸、硫酸、溴等组成.此试剂在碱性条件下,易被蛋白质中酪氨酸的酚基还原呈蓝色反应,其色泽深浅与蛋白质含量成正比. 由此可见是它们的显色灵敏度不同造成的.
李怖胆1897蛋白质中角蛋白含量较高的话,用什么方法测蛋白含量比较简单准确.
洪彭师15620119371 ______ Folin-酚试剂法(Lowry): 利用蛋白质分子中酪氨酸和色氨酸残基 (酚基)与还原酚试剂(磷钨酸-磷钼酸)起蓝色反应.1951 年, Lowry 对此法进行了改进,先于检测样品中加碱性铜试剂,再与酚试 剂反应,提高了灵敏度.灵敏度1ug 考马斯亮蓝染色法: 与氨基黑和考马斯亮蓝结合呈色,与考马斯亮蓝 的呈色反应在一定浓度范围内可进行定量测定.灵敏度1~5ug. 灵敏度差不多, Folin-酚法是一般实验室中经常使用的方法.操作简单干扰比较多,考马斯亮蓝染色法复杂一点,干扰较少.
李怖胆1897紫外吸收法定量蛋白质的优点和缺点? -
洪彭师15620119371 ______[答案] 1.蛋白质测定的Folin-酚比色法(即Lowry法)的定量范围为5~100μg蛋白质,灵敏度高;但操作要费较长时间,且Folin试剂显色反应由酪氨酸、色氨酸和半胱氨氨酸引起,因此样品中若含有酚类、柠檬酸和巯基化合物均有干扰作用;不同蛋白质因酪...
李怖胆1897去除蛋白质或蛋白质提取的人名实验请问有个去除蛋白质或蛋白质提取的
洪彭师15620119371 ______ Folin—酚试剂法(Lowry法) (一)实验原理 这种蛋白质测定法是最灵敏的方法之一.过去此法是应用最广泛的一种方法,由于其试剂乙的配制较为困难(现在已可以订...
李怖胆1897folin酚试剂法测定蛋白质含量所用器材有哪些 -
洪彭师15620119371 ______ 仪器有分光光度计 台式离心机 精密天平 三角瓶 烧杯 量筒 移液器 Folin—酚试剂法最早由Lowry确定了蛋白质浓度测定的基本步骤.百以后在生物化学领域得到广泛的应用.这种蛋白质测定法是最灵敏的方法之一.过度去此法是应用最广泛的一...
李怖胆1897测定蛋白质含量的方法 缺点 -
洪彭师15620119371 ______[答案] ①凯氏定氮法 原理:蛋白质平均含氮量为16%.当样品与浓硫酸共热,蛋白氮转化为铵盐,在强碱性条件下将氨蒸出,用加... ③Folin酚法(Lowry) Folin酚法是biuret 法的延伸,所用试剂由试剂甲和乙两部分组成.试剂甲相当于双缩脲试剂(碱性铜...
李怖胆1897请教Lowry法中Folin试剂的配制的具体方法 -
洪彭师15620119371 ______ folin-酚试剂的配置 folin-酚试剂甲:将1g na2co3 溶于50ml 0.2mol/l naoh中,再把0.5g cuso4.5h2o溶于100ml 1%酒石酸钾钠溶液.然后将前者50ml与后者1ml混合,此试剂只能用1天,过期畅丹扳柑殖纺帮尸爆建失效.folin-酚试剂乙:在磨口回...
李怖胆1897请问如何解决folin酚法的干扰问题 -
洪彭师15620119371 ______ 做空白试验消除
李怖胆1897如何使用Folin - 酚法测定蛋白酶的活力? -
洪彭师15620119371 ______ 实验原理:采用Folin-酚法测定,Folin-酚试剂由甲试剂和乙试剂组成.甲试剂由碳酸钠,氢氧化钠,硫酸铜及酒石酸钾钠(KNaC4H4O6•4H2O)组成.多肽中的肽键在碱性条件下,与酒石酸钾钠铜盐溶液起作用,生成紫红色络合物.乙试剂...
李怖胆1897蛋白质含量的测定都有哪几种方法,适用情况以及优缺点 -
洪彭师15620119371 ______ ①凯氏定氮法 原理:蛋白质平均含氮量为16%.当样品与浓硫酸共热,蛋白氮转化为铵盐,在强碱性条件下将氨蒸出,用加有指示剂的硼酸吸收,最后用标准酸滴定硼酸,通过标准酸的用量即可求出蛋白质中的含氮量和蛋白质含量. ②双缩脲...