pcr产物各种胶图改善

卜恒郝836您好~PCR产物,AT含量很高,双向测序的效果都很差,大约过了100bp就是杂峰了,我该如何做? -
皮武全19329772719 ______ 你的序列AT含量很高,测序结果不好,所以我怀疑是你的片段里有polyA或者是polyT,一般超过7个以上的都会引起后续的测序乱峰,你的乱峰前边如果是一连串的A或者T的话,那就是这个原因,想要测好得靠运气,即使是克隆也无法避免,你的片段这么长,仅用两个引物是肯定测不全的,必须还要再额外设计测序引物.如果没有poly结构则也可能是片段重复,这也会导致乱峰或移峰,现象和poly结构一样.如果这两种情况都没有,那就是你PCR做得不好,非特异太多且大小相近,需要改善条件或者重设引物.

卜恒郝836PCR 内参 跑胶 -
皮武全19329772719 ______ 如果按理论算的话,电泳条带亮度的不同代表起始浓度的不同,但是,你要知道,DNA模板浓度达到一定程度之后,PCR产物亮度和起始模板浓度并不是完全成正比的.如10^7次方的模板和10^8次方的模板PCR的产物电泳亮度可能区别就不是很大,也就是扩增效率会随着模板浓度的变化而变化.所以我们要尽量使内参的条带亮度一致,以保证模板浓度一致,这样就尽量可以使各个不同模板之间在扩增目的基因时的扩增效率一致.

卜恒郝836二次PCR产物,电泳条带与第一次PCR一样不明显,如何解决 -
皮武全19329772719 ______ 首先你的确认你没有用错东西.如果没有问题,二次PCR的话,那得看你的延伸时间和退火温度了.2轮的退火温度最好调高些,以增强特异性.延伸时间上,看你的产物大小.如果需要大条带,那延伸时间意义不大,最好能对一轮产物进行预期条带的回收后再做2轮,或者进行巢式PCR;要是需要小条带那就简单了,直接缩短延伸时间就好了.

卜恒郝836PCR 后酶切,凝胶电泳,EB染色,做的胶是一块胶上左右两个半块,每次右边半块不显色或者特别浅 -
皮武全19329772719 ______ 看看胶是否水平,电泳是否水平.我怀疑你胶总是左边高,右边矮. 还有,你的电压太高,跑的时间过长,导致胶过热也是原因之一.不要超过100V,一般1%缓冲液跑15-20分钟足够了. 还有一种情况就是,右边的样本都跑出胶了,你看到的是左边的样本跑到右边的胶里面了,最好每跑5-10分钟看一下,以防跑过的可能

卜恒郝836kod plus高保真酶 怎么加A尾巴?谢谢回答! -
皮武全19329772719 ______ 方法一:直接加0.5ul Taq,70度,10min 即可,但是这种方法效率较低,但是简单,快速. 方法二:PCR产物,切胶回收,浓缩后加10*PCR buffer 1ul, dATP (2mM) 1ul, Taq 0.5ul, 加水至补充体积至10ul,70度 20-30min即可.

卜恒郝836pcr产物分离问题1.PCR产物中分别有360bp和340bp的产物,能用琼脂糖电泳使它们分开吗?如果可以用多少浓度的胶和多大的电压进行呢2.PCR产物中分别... -
皮武全19329772719 ______[答案] 1. 应该可以,2-2.5的胶,5v/cm 2. 不行 不知你分开它们只是为了有一幅图,还是为了分别获得它们. 如果是后者,可以通过连接载体,挑取克隆实现.

卜恒郝836二次PCR的产物电泳图观察,所有样都不出现条带,而是弥散状的,从投拖到尾,求高手分析一下 -
皮武全19329772719 ______ 非特异性扩增太多,建议稀释模板.提高退火温度,再试试.还有如果一次PCR产物也是如此,建议切胶回收与目的条带相近处的弥散带作为二次的模板.

卜恒郝836如何有效提高凝胶纯化pcr产物的效率
皮武全19329772719 ______ 1 用好的柱子(也就是买好公司的回收盒),或用玻璃奶(对于大片段感觉损失比较小) 2 切胶时间短,用长波; 3 溶完胶后凉一下再上柱,高温不易使DNA与柱结合; 4 可以二次上柱 5 将洗脱缓冲液预先65度加热,大片段洗脱时最好放几分钟再离心; 6 可以二次洗脱.

卜恒郝836低浓度模板,如何扩增清晰地PCR产物 -
皮武全19329772719 ______ PCR反应前5个循环可以降低退火温度5°,后面30-35个循环恢复正常退火温度.也可以以第一次PCR的产物作为二次PCR的模板.

卜恒郝836PCR条件优化 -
皮武全19329772719 ______ 在PCR的优化开始阶段,应用新的DNA模板,引物或热稳定DNA聚合酶等材料建立的PCR方法,其扩增效果一般总不是最佳的.这种PCR反应通常要求尽量抑制非特异性扩增和(或)增加目的DNA产物的产率.表1列举了一些通常遇到的问题...