pcr引物的选择原则

东些呢3298PCR的原理是什么 -
张厕是18344495337 ______[答案] 聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction ,PCR)是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术.它具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点;能在一个试管内将所要研究 的目的基因或某一DNA片段于数小时内扩增至...

东些呢3298PCR中引物如何设计,详细点哈
张厕是18344495337 ______ 一、可以使用oligo 6 或者primer5 等软件设计.用这些软件选择引物,主要就是看引物的稳定性,形成二聚体的可能性,退火温度等等参数. 二、如果你的序列同源性不高,GC含量也还可以的话,可以使用一些经验性原则.比如 1. 寡核苷酸链退火温度用经验公式2x(A+T)+4x(G+C),一般用58度.不一定非是58 度,但用58度往往可以找到比较合适的序列. 2. 长度在18-21bases左右. 3. C、G含量40%-60%,分布比较均匀. 4. 3'端最后一个碱基最好是G或C,末尾不要有连续的GC. 5. 两条引物不会形成二聚体. 6. 单个引物不形成发夹结构.等等 这些原则在分子生物学书上有详细的介绍.

东些呢3298pcr引物的设计有哪些要求 -
张厕是18344495337 ______[答案] 引物的设计一般要考虑以下几个问题:1.长度,至少要16bp,通常为18-30bp2.解链温度(Tm值)3.避免引物内部或引物之间存在互补序列(3个碱基),从而减少引物二聚体的形成以及引物内部二级结构的形成4.G+C含量尽量控制在...

东些呢3298PCR产物如何长久保存?最长可保存多久? -
张厕是18344495337 ______ 如果近期要用的话就放4度.近期不用的话最好放-20度.应为反复冻融会使得DNA受损.未纯化的PCR产物-20℃放上一周没有什么问题. 对于PCR产物,一般要求纯化后再保存,洗脱液为TA或者纯水,为了后续实验的方便,是不会再加甘油的,所以,保存时间肯定无法和加了甘油的marker比较;对于比较重要的PCR产物. 扩展资料: 设计PCR 引物时的一般原则 (1)引物长度- 一般15~ 30碱基,过短则特异性低; 过长则会引起引物间的退火而影响有效扩增. (2) 避免内部二级结构,避免序列内有较长的回文结构,使引物自身不能形成发夹结构.

东些呢3298pcr反应体系如何选择 -
张厕是18344495337 ______ 你好, 标准的PCR反应体系: 10*扩增缓冲液 10ul 4种dNTP混合物 各200umol/L 引物 各10~100pmol 模板DNA 0.1~2ug Taq DNA聚合酶 2.5u Mg2+ 1.5mmol/L 加双或三蒸水至 100ul PCR反应五要素: 参加PCR反应的物质主要有五种即引物...

东些呢3298实时荧光定量PCR中两种引物的设计有什么要求 -
张厕是18344495337 ______ 参照以下real-time PCR引物设计原则:1.最好位于编码区5'端的300-400bp区域内,可以用DNAman,Alignment 软件看看结果.2. 产物不能形成二级结构(自由能小于58.61KJ/mol).3.引物长度一般在17-25碱基之间,上下游引物不能相差太...

东些呢3298pcr要加入什么原料是否需要RNA引物 -
张厕是18344495337 ______[答案] 无明显同源性. 引物量: 每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以最低引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会. 酶及其浓度 目前有两种Taq DNA聚合酶供应, 一种是从栖热...