pcr目的基因和内参基因

金融界2024年4月15日消息，据国家知识产权局公告，北京大学取得一项名为“一种绝对定量细胞内DNA双链断裂数量的方法及应用“，授权公告号CN114032292B，申请日期为2021年12月。

专利摘要显示，本发明公开了一种绝对定量细胞内DNA双链断裂数量的方法及应用。该方法将带有末端修饰的外源核苷酸片段插入至固定细胞基因组DNA双链断裂处，然后将基因组片段化并连接衔接接头，针对外源核苷酸片段和衔接接头设计特异性PCR引物和特异性荧光探针，结合细胞内参基因，构建数字液滴PCR体系，定量细胞内DNA双链断裂数量。本发明使得检测DNA双链断裂摆脱了序列依赖性，广泛适用于绝对精准定量动植物内因疾病、辐射、药物或者基因编辑等各种原因造成的DNA双链断裂数量，可用作检测射线损伤、化学药物损伤、基因编辑脱靶效率等问题的有效工具，在分子生物学和临床诊断中具有非常广阔的应用前景。

本文源自金融界

潘咳岸923做RT - PCR内参的作用是什么?应该如何选择管家基因 -
暴印昆15812147054 ______ 内参就是在cDNA里面的啊 比如你有三种反转录的cDNA 就分别用内参的引物做三组 和目标基因一起做就行了 不过是要单独加 不是和目标基因的引物加在一个孔里

潘咳岸923real - time pcr 能测相同个体不同基因之间的的表达差异吗 -
暴印昆15812147054 ______ 可以放在一起比较,同一组织中有一些特定表达的基因如β-actin、GAPDH之类的,你可以选择合适的一种作为内参基因,同一个样品的cDNA或者RNA进行目的基因(一个或多个)和内参基因RT-PCR后比较你的目的基因和内参基因的Ct值,使用△△Ct法计算出目的基因与内参基因的比例,这样也就可以比较出你的不同目的基因之间的比例

潘咳岸923常用的内参基因及其使用范围?请大家推荐生物方面的论坛 -
暴印昆15812147054 ______ 内参即是内部参照,它们在各组织和细胞中的表达相对恒定,在检测基因的表达水平变化时常用它来做参照物 你可以去生物帮那里了解这方面的信息,那儿技术文档、视频资源丰富,我很喜欢到那里找想要的东西,而且还有很多软件可以下载,...

潘咳岸923做RT - PCR的时候为什么要设置标准反应体系和管家基因反应体系? -
暴印昆15812147054 ______ 在做QRT-PCR时,一定要有内参,即在PCR时,每个标本都要做对应的内参,而且每次都是看家基因,一般用bate-actin,有时也用GAPDH.内参的选择:普通PCR内参的大小没有多大要求,但real time一般选择300bp以下.它的作用在于你提取的RNA逆转录成cDNA时,加入的浓度可能会不一致,即使用分光广度计测其浓度,也会有仪器误差,跑出的条带要进行灰度分析.用目的基因的积分光密度比上内参的光密度就是你这个基因实际表达的量.希望对你有所帮助.

潘咳岸923相对定量PCR是用目的基因拷贝数/内参拷贝数,还是用2 - ΔΔCt值去分析?为什么有的文献是直接用前者? -
暴印昆15812147054 ______ 2-ΔΔCt法.定量的作用是比较两个或多个样本(前提是细胞数目要相等)基因表达量差异的,基因拷贝数/内...

潘咳岸923,第一次做荧光定量PCR,内参基因可以跑出来,但是荧光峰度比较低,溶解曲线也不错,但目的基因完全跑不出 -
暴印昆15812147054 ______ 朋友,首先跟你说一下我的经验,其实这里有个误区,其实普通PCR对Realtime PCR的指导意义实在是太小,因为realtime PCR的引物跟普通PCR的引物有很大差别,realtime PCR的引物因为要顾及试验体系的要求,所以在引物性能方面有一...

潘咳岸923gpda gene是内参基因吗 -
暴印昆15812147054 ______ 内参就是一个表达量在各个组基本保持不变的基因,又叫看家基因,比如常用的GAPDH, actin.或者18s rRNA也可以.扩增曲线和溶解曲线不是一个概念.扩增曲线是每扩增一个循环,测量一次荧光强度.这个由底物的浓度和扩增效率所决定...

潘咳岸923荧光定量PCR相对定量,目的基因引物浓度不同,b - action需要以不同浓度扩增2次吗? -
暴印昆15812147054 ______ 不需要,一般体系里面引物都是过量的,b-action的含量相对恒定的,你相对定量看的事ΔΔCt值