pei细胞转染步骤

郜荷怨2855免疫共沉淀的实验过程 -
蒙侨栏19817377849 ______ (1)转染后24-48 h 可收获细胞,加入适量细胞裂解缓冲液(含蛋白酶抑制剂),冰上裂解30min, 细胞裂解液于4°C, 最大转速离心30 min后取上清;(2)取少量裂解液以备Western blot分析,剩余裂解液加1μg相应的抗体加入到细胞裂解液,4...

郜荷怨2855什么是第三代阳离子聚合物(PEI)“转染试剂 -
蒙侨栏19817377849 ______ 没有第三代阳离子聚合物的说法,只有离子化合物和共价化合物的说法. 游离态的金属钠在氯气中燃烧时,金属钠里的钠原子失去一个电子成为钠离子,氯气分子里的氯原子得到一个电子成为氯离子,像氯化钠这种阳、阴离子间通过静电作用而...

郜荷怨2855PBS冲洗对细胞有影响吗?我们在转染前为了去除残留的含血清的培养基,就用PBS冲洗两次. -
蒙侨栏19817377849 ______ 非高手,但用lipofectamine 2000做过转染的冒个泡 用PBS轻柔地冲洗细胞对细胞生存力没什么影响,但会造成细胞损失.如果发现细胞损失量比较大,可以仅冲洗1次或者不冲洗(但是倒培养基要尽量倒得干净点). 至于突起为啥没了,那就不清楚了.该不会你们用的PBS有问题吧…… 转染的话按照说明书上操作的就行了.成功率还是很高的.

郜荷怨2855什么是＂质子海绵效应＂? -
蒙侨栏19817377849 ______ 当溶酶体内的pH下降时,PEI能够大量捕获质子,并引起Cl-内流,导致溶酶体渗透性肿胀,最后溶酶体破裂从而将内吞的DNA释放到细胞质(即质子海绵效应) 当溶酶体内的pH下降时,PEI能够大量捕获质子,并引起Cl-内流,导致溶酶体渗透性肿胀,最后溶酶体破裂从而将内吞的DNA释放到细胞质. 带有阳离子颗粒与细胞膜结合,细胞内吞作用进入细胞形成内吞体,内吞体与溶酶体融合.颗粒上不饱和的氨基螯合由质子泵(V-ATPase)提供的质子,质子泵持续开放,每个质子导致一个氯离子和一个水分子潴留溶酶体内,引发溶酶体肿胀破裂,颗粒释放,进入细胞质,进一步导致线粒体损伤和细胞凋亡.

郜荷怨2855什么样的转染试剂转染效果比较好呢 -
蒙侨栏19817377849 ______ 只能给你建议,我用过PEI(聚乙烯亚胺和)invitrogen的lipo2000,lipo2000效率要高一些,但PEI转一些常规的细胞也够用了.其他的转染试剂我没用过

郜荷怨2855pei 为什么能和dna 结合 -
蒙侨栏19817377849 ______ 人表皮生长因子受体2 游离的配体往往会和配体-PEI/DNA复合物竞争细胞表面受体的结合位点,从而 抑制复合物的转染,因此在研究中应该在配体与PEI偶联后将未反应的游离配体除 去.直接偶联在PEI上的配体往往会在PEI与DNA形成复合物...

郜荷怨2855hek293细胞局部太密能转染吗 -
蒙侨栏19817377849 ______ 建议重新铺板,否则影响转染试剂DNA复合物与细胞接触. 另,老师您也可以尝试用悬浮转染的方法.义翘神州的HEK293无血清瞬时转染表达系统套装产品,价格别国外试剂实惠了一个数量级.并且有国内著名科研院所、团队实力验证.

郜荷怨2855分子克隆引入寄主细胞方法有什?分子克隆引入寄主细胞方法有什么
蒙侨栏19817377849 ______ 分子克隆引入寄主细胞常用两种方法:①转化或转染,方法是将重组质粒DNA或噬菌体DNA(M13)与氯化钙处理过的宿主细胞混合置于冰上,待DNA被吸收后铺在平板培养基上,再根据实验设计使用选择性培养基筛选重组子,通常重组分子的转化效率比非重组DNA低,原因是连接效率不高,有许多DNA分子无转化能力,而且重组后的DNA分子比原载体DNA分子大,转化困难

郜荷怨2855聚醚酰亚胺的发展 -
蒙侨栏19817377849 ______ 国外聚醚酰亚胺主要是美国通用电器公司生产销售.目前发展趋势在于提高耐热性,为此引入对苯二胺结构和与其它特种工程塑料组成合金,为提高PEI机械强度,而采用PC、PA等工程塑料组成合金.聚合工艺方面正在开发双螺杆连续挤出聚...

郜荷怨2855如何用流式细胞仪检测转染细胞的效率? -
蒙侨栏19817377849 ______ 阴性对照最好用转染无GFP载体的细胞,因为转染可能会改变细胞的自发荧光本地 确保阴性对照和实验细胞的浓度相同,具体多少倒是无所谓,不要太稀释就好 上机前,用细胞滤网过滤掉大块未消化的杂质 不要固定,GFP固定后荧光强度会下降.