promega转染试剂
郝畅以4457如何预测和鉴定miRNA的靶基因 -
钟克阮15939867275 ______ iRNA通常位于基因间或者内含子区域,然后由Exportin 5等转运至细胞质,在细胞核内有RNA聚合酶Ⅱ转录产生具有帽子结构多聚腺苷酸尾巴的pri-miRNA,RISC作用于特异mRNA的3'UTR.Dicer将pre-miRNA切割成约22nt的双链miRNA,从而抑制翻译过程或者直接讲解mRNA.在核酸酶Drosha及其辅助因子Pasha的作用下.成熟miRNA还需要与Argonaute蛋白等组装形成RNA诱导沉默复合体(RISC),pri-miRNA被处理成70个核苷酸组成具有茎环结构的pre-miRNA,双链miRNA讲解形成单链的成熟miRNA
郝畅以4457紧急求助,有谁用过promega的总RNA提取试剂盒 -
钟克阮15939867275 ______ promega的试剂盒我用了1个多月,提总RNA很好的,我们实验室一直在用,我们提取的RNA跑电泳很好,RT-PCR之后的actin也很好,说明我们的提取没有问题.至于最后我们是溶于30ulDEPC水中.我其中的步骤如下: 1.在培养皿中加入2ml ...
郝畅以4457双荧光素酶检测pgl3 - basic数值有10的6次方数量级,理论?
钟克阮15939867275 ______ 靶基因不是应该构建在basic vector, promoter vector 或是enhance vector中吗?是promega的载体吗?真的有很多因素可以影响到比如:平行孔中细胞状态、转染效率、加样准确性等等都会影响的.其次我觉得你的荧光值太低了吧,接近于本底值了,可信度不好,我做的时候,PRL的荧光值能达到7位数啊,这样会减少其他因素的干扰作用,波动相对来说很小(使用的是Promega的试剂盒).我们做双荧光时,内参PRL-TK和PGL3的用量不是按照protocol上的50:1来的,而是5:1,PGL3的荧光值和PRL的在一个数量级上.重复性挺好的
郝畅以4457invitrogen的mlv反转录试剂盒合成的是单链cdna还是双链cdna -
钟克阮15939867275 ______ 氯仿/,混匀,常温下13000g离心5分钟,混匀,然后顺序加入下列试剂(promega).离心完毕.离心完毕,剧烈振荡后,加入1ml 70%乙醇洗涤沉淀. 第二日,13000g离心60分钟以充分沉淀双链cDNA;ul) 2ul BSA(10mg/. 吸取上清至另一eppendof...
郝畅以4457哪位同学可以介绍下Luciferase 原理 -
钟克阮15939867275 ______ 自然界中广泛分布着生物发光有机体,其中包括细菌、真菌、鱼、昆虫等.在这些生物发光有机体中催化生物发光反应的各种酶都称之为荧光素酶(Luciferases),底物则命名为荧光素(Luciferin).自1986— 1987 年首次被当作报告基因使用...
郝畅以4457miRNA的靶基因怎么预测 -
钟克阮15939867275 ______ 现在有一些预测miRNA靶基因的算法和网站,免费的,例如miRtarget等,网上一搜一大把.可以用它们去预测.但这些算法常常不是很靠谱,因此应多几种算法综合考虑.但这样仍然不是特别靠谱.实验筛查的方法目前最有效的是转录组+翻译...
郝畅以4457荧光素酶实验(luciferase assay)通常变化多少倍才算明显? -
钟克阮15939867275 ______[答案] Dual-Luciferase®Reporter Assay System E1910 Dual-Luciferase® Reporter (DLR™) Assay System (Dual-Luciferase® 双萤... (为了得到Dual-Luciferase® 试剂盒的最佳检测结果,Promega推荐使用针对该检测过程进行过确证的发光检测仪.这些发光...
郝畅以4457有人用takara的消除gDNA的反转录试剂盒吗 -
钟克阮15939867275 ______ TAKARA的RR047A操作方便,这两款试剂盒都能对RNA样品中的gDNA有效去除.hiphotos.Life.hiphotos.推荐两款kit TAKARA和HaiGene、再购买Rnase Inhibitor自己配制反转录体系就可以了,还是选用耐高温的反转录酶更理想.HaiGene的...
郝畅以4457哪位同学可以介绍下Luciferase原理 -
钟克阮15939867275 ______ 荧光素酶报告基因 Luciferase报告基因系统是以荧光素(luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶(fireflyluciferase)活性的一种报告系统.中文名 荧光素酶报告基因 外文名 Luciferase 底 物 荧光素(luciferin) 生物荧光 bioluminescence 转录因...
郝畅以4457双荧光素酶报告基因和荧光素酶报告基因一样吗 -
钟克阮15939867275 ______ 双荧光素酶报告基因载体 报告基因检测被广泛应用于研究基因表达及外部刺激下原核和真核细胞的反应.luciferase报告基因系统是以荧光素(luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶(fireflyluciferase)活性的一种报告系统.可以极其灵敏、高...