rna提取中氯仿的作用
TRIZOL是一种新型总RNA抽提试剂，可以直接从细胞或组织中提取总RNA。其含有苯酚、异硫氰酸胍等物质，能迅速破碎细胞并抑制细胞释放出的核酸酶。TRIZOL的主要成分是苯酚。TRIZOL在破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性，因此对纯化RNA及标准化RNA的生产十分有用。
TRIZOL是由Invitrogen（现在属于Thermo Fisher Scientific）公司开发的试剂。该公司于1992年推出了TRIZOL试剂，用于细胞和组织中核酸的提取。TRIZOL基于一种名为"acid guanidinium-phenol-chloroform"（酸性胍-酚-氯仿）的三重相分离方法。TRIZOL的开发源于20世纪70年代末和80年代初的研究工作。在当时，科学家们对于高质量的RNA提取方法感兴趣，因为高质量的RNA对于各种分子生物学研究非常重要。然而，传统的RNA提取方法受到DNA和RNA降解、样品丢失等问题的影响，提取效果不佳。为了克服这些问题，一个名为Chomczynski和Sacchi的科学家团队提出了酸性胍-酚-氯仿三重相分离方法。该方法基于胍的碱性特性，通过胍与DNA或RNA结合以避免降解。酚用于裂解细胞，并与酸性胍和核酸形成络合物，从而将核酸保护在有机相中。氯仿用于分离蛋白质和界面相中的DNA/RNA复合物。Invitrogen公司在Chomczynski和Sacchi的方法的基础上开发了TRIZOL试剂，并于1992年推出。TRIZOL在分子生物学研究中得到广泛应用，成为提取总RNA、DNA和蛋白质的常用试剂之一。
TRIZOL的主要成分是苯酚。苯酚的主要作用是裂解细胞，使细胞中的蛋白，核酸物质解聚得到释放。苯酚虽可有效地变性蛋白质，但不能完全抑制RNA酶活性，因此TRIZOL中还加入了8－羟基喹啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNase（RNA酶）。TRIZOL是从细胞和组织中提取总RNA的即用型试剂，在样品裂解或匀浆过程中，TRIZOL能保持RNA完整性。加入氯仿后，溶液分为水相和有机相，RNA在水相中。取出水相，用异丙醇可沉淀回收RNA。TRIZOL试剂是一种单步法的试剂，能够在一个试管中完成细胞裂解和核酸、蛋白质的提取。其作用原理可以分为以下步骤：
1.细胞裂解：TRIZOL试剂中含有酚，可以迅速破坏细胞膜，使RNA、DNA和蛋白质释放出来。
2.聚集：TRIZOL试剂中含有胍类化合物（如盐酸胍），可以使RNA和DNA在酚的存在下与胍形成络盐，从而使RNA和DNA聚集在有机相中，保护核酸不被降解。
3.盐析：TRIZOL试剂中的氯仿用于与有机相中的RNA/DNA络盐形成亲水相，从而将RNA/DNA精准分离出来。同时，蛋白质也会被分离到氯仿相中。
4.进一步纯化：得到的RNA/DNA可以通过洗涤、乙醇沉淀等方法进一步纯化，以获得高质量的核酸样品。
总体来看，TRIZOL试剂通过胍和氯仿的配合使用，可完成细胞/组织的裂解、RNA/DNA的提取和蛋白质的分离，具有操作简便、提取效率高、成本较低等特点，因而成为常用的核酸提取试剂之一。
检测小贴士！
在平时处理需要提取RNA的送测样品时，如果样本量过于少（比如细胞或者少量的菌体沉淀等样品），可以在去掉培养液后加入适量的TRIZOL后再进行样品寄送，可以减少样本降解的风险。血液样本除了可以加抗凝剂或用抗凝管寄送外，也可以按3mL血液样本加入9mL TRIZOL试剂的比例（1:3）混匀后寄送。
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臧萱蚂577请问提取RNA中乙酸钠的作用. -
吉炭晓17038336295 ______ RNA提取中重要的是去除其他杂质的干扰.由于糖类和核酸的许多理化性质相似.因此较难将他们分开.而在沉淀RNA时,也产生多糖的凝胶状沉淀,这种含有多糖的RNA沉淀难溶于水,或溶解后产生粘稠状的溶液.由于多糖可以抑制许多酶的...
臧萱蚂577TRIzol法提取RNA每个步骤的作用是什么?其实自己多多少少知道,但是又不是很确定.希望知道的朋友告诉一下.因为自己还没有做这个实验,所以都是很模糊... -
吉炭晓17038336295 ______[答案] TRIzol使样品匀浆化,细胞裂解,溶解细胞内含物,同时因含有RNase抑制剂可保持RNA的完整性.在加入氯仿离心后,溶液分为水相和有机相,RNA在水相中.取出水相用异丙醇沉淀可回收RNA;用乙醇沉淀中间层可回收DNA;用异丙醇沉淀有机相...
臧萱蚂577CTAB法提RNA各药品作用 -
吉炭晓17038336295 ______ 所有用于RNA提取的药品都必须保证无RNA酶,配药品的水必须是DEPC处理过的,所用的枪头等耗材也必须用DEPC处理,提取时应该尽量保证室内干净,少讲话等.我们提取的时候一般会选择试剂盒法,操作时间短,RNA的质量也比较好.我没有试过CTAB法提RNA,但是我想各药品的量不会有太苛刻的要求.关键操作迅速,步骤少一些. 另外,电泳所用的电泳槽都要处理,懒一下不处理也可以,但是一定要洗干净,并换上新缓冲液.祝你成功.
臧萱蚂577提RNA过程中是根据什么原理除DNA的 -
吉炭晓17038336295 ______ 蛋白质在有机溶剂中变性所以形成沉淀,中间那白色的是变性的蛋白质.我们做过提取DNA的实验,用的是饱和酚提取的,后来又用了氯仿的.DNA、RNA很容易被分解,特别是RNA,RNA酶到处都有,我们在做DNA提取时用到EDTA抑制DNA酶的活性,防止被降解.分层不是看分子的大小的,看它在离心力的作用下运动的快慢,一般密度大的运动的快一些在下面.下层有机相中有一些脂类
臧萱蚂577RNA分离操作注意事项书上说在核酸提取时可以用酚,但是酚会与水有一定比例的互溶,而水中残留的酚会对核酸的酶反应产生强的抑制,故要加氯仿求问:... -
吉炭晓17038336295 ______[答案] 1.最后RNA是要沉淀下来的,不去也得去掉 2.酚会影响下一步反应,比如之后的逆转录 3.酚有毒,去掉也好
臧萱蚂577提取RNA以后要做什么 -
吉炭晓17038336295 ______ 是的,做PCR后再进行测试,保持活性.
臧萱蚂577请问Trizol试剂提取RNA相关问题,请问下为什么在Trizol试剂提取RNA时,加入氯仿离心后RNA在上层水相,DNA在中间层,蛋白质在下层有机相,但用... -
吉炭晓17038336295 ______[答案] 我记得是pH值的关系 不过也没那么严格,实际上提取RNA后如果可能,还是需要一步加入DNase消化的过程
臧萱蚂577怎么提取RNA? -
吉炭晓17038336295 ______ 我们实验室用的是TRIZOL试剂盒,原理就是先组织匀浆,然后将RNA与蛋白质等分离,这个用的是戊二醇,然后再用柱子加各种溶剂,各种12000r/min离心,多次离心之后,经过洗涤干燥,再溶于DEPC水就可以冷藏了. 整个实验中要注意尽量避免实验材料与空气接触,以免被RNA酶降解其中的RNA,要知道RNA酶可是无处不在啊,还有DEPC是有毒的(一般分子实验所用的都多多少少有毒...),所以要小心~
臧萱蚂577使用TRNzol过程中如何防止RNA降解 -
吉炭晓17038336295 ______ TRNzol是可即用的从细胞和组织中提取总RNA的试剂,在样品裂解或匀浆过程中,TRNzol可保持RNA完整性,同时裂解细胞,溶解细胞内含物.加入氯仿后,溶液分为水相和有机相,RNA在水相中.取出水相,用异丙醇可沉淀回收RNA;中间层用乙醇沉淀可回收DNA;有机相用异丙醇沉淀可回收蛋白.得到的DNA可用做标准,比较不同样品RNA得率.