rna+od260+280
俞养姣1234如何利用OD260:OD280比值鉴定蛋白纯度是否被核酸污染? -
翟视逸13986861446 ______ 当蛋白中掺入了核酸之 后,OD260:OD280比值变化很明显,尤其是纯的蛋白制品中掺入了一点点核酸后,变化最明显.例如:纯的蛋白样品,其OD260:OD280比值为 0.57,而掺入5%的核酸之后,该笔直上升到了1.06. 但是反过来却是不成...
俞养姣1234如何说明DNA提取中有RNA污染 -
翟视逸13986861446 ______ 测OD的方法是测不出RNA污染的,因为RNA的260/280的值和DNA近似.电泳检测的话,主要是看RNA的含量.换而言之,实际上最相关的是你提取的时候的组织的生长状况.一般来说,如果是分生组织等提取的DNA,会有较大的RNA污染.这时候你做电泳可以明确看到RNA的条带,而且有时候会比DNA带更为明显.如果提取过程中RNA降解了,那么你会看到你的DNA条带下面有一片很亮的拖带.如果你提取的组织是种子阿孢子阿等休眠组织时,由于这些组织生命活动并不旺盛,你提取的DNA就很有可能看不到任何RNA的污染,当然这并不代表没有,只不过你看不到罢了. 天#猫美国进口普卫欣提示:雾霾天气出行记得做好防护.
俞养姣1234提取的c级rna,od 260/280的比值均大于2,做转录组测序时有影响吗 -
翟视逸13986861446 ______ 1、提取RNA测浓度时A260/A280大于3的原因可能是降解.2、一般对于DNA,纯净的时候比值是1.8,而对于RNA则是接近2.0.如果超过这个值,那么最有可能的就是核酸降解了,因为寡聚的核酸和核苷酸在260的吸收峰比长链核苷酸要大,所以会使比值上升.
俞养姣1234测DNA OD260/OD280时,纯净DNA的比值为1.8, RNA为2.0.若比值高于1.8说明DNA样品中的RNA尚未除尽RNA与DNA的差别在于RNA为单链,含尿嘧啶... -
翟视逸13986861446 ______[答案] 是的.单链的RNA的碱基中的共轭双键暴露的更多,在260nm处吸收的更多. 王镜岩《生物化学》教材上讲的有.
俞养姣1234提取的DNA有RNA污染? -
翟视逸13986861446 ______ 仅仅260/280大于1.9并不能说明有RNA污染,1.8到2.0之间应该都是正常的.要确定有没有RNA污染,可以跑胶检测,污染的RNA会形成一个拖带.不放心可以加一点RNA酶.
俞养姣1234做荧光定量PCR,前期提取RNA的时候一定要加入DNase I和RNase inhibitor吗?
翟视逸13986861446 ______ 1.其实反转录要求不是很高,所有器具消毒操作带手套口罩就行,没必要加RNaseInhibitor 2.OD260/280实际上反应的是蛋白质杂质的比例,可以间接的反应有没有RNA酶污染,所以这个比值低了有可能是RNA酶污染,也可能是提取操作或者试剂问题导致蛋白质残留过多. 从个人经验来看,做普通跑胶比值要求高一些在1.80-2.20之间;如果做实时定量要求就会低很多,1.5我都做过,影响不是很大,总量少不怕,就怕有差异,关键是点样不容易均一,因为实时定量非常敏感,很小的差异都会放大N倍,一般就靠增大总反应体积来减少误差,30-50微升的时候由操作带来的误差会大大减少,而很多人用的10微升体系做10次能有2次正常结果就不错了.
俞养姣1234如何去除DNA中的RNA?提取的DNA OD260/280的值很高,估计是有RNA的污染,在网上看到加入RNA酶降解RNA,放置30分钟,然后如何去除DNA中的... -
翟视逸13986861446 ______[答案] 1.DNA样品中加适量RNA酶(0.1~0.3ul) 37 ℃水浴保温30min. 2.DNA样品放一段时间,RNA自动降解因为RNA没有比DNA稳定. 3.DNA溶于酚但是RNA不溶. 你看看情况那个方法比较好. 如果不去除RNA酶对于DNA不会有什么影响.
俞养姣1234胞质多角体病毒含有最大的双链RNA分子,有5250bp.如果是伸展状态,该双链RNA分子长度是多少? -
翟视逸13986861446 ______ 参考DNA双螺旋结构参数.DNA双螺旋的直径为2nm,碱基堆积距离为0.34nm.5250bp的双螺旋长度就应该是5250bp x 0.34nm/bp = 1785nm = 1.785um.
俞养姣1234怎么提取RNA? -
翟视逸13986861446 ______ 我们实验室用的是TRIZOL试剂盒,原理就是先组织匀浆,然后将RNA与蛋白质等分离,这个用的是戊二醇,然后再用柱子加各种溶剂,各种12000r/min离心,多次离心之后,经过洗涤干燥,再溶于DEPC水就可以冷藏了. 整个实验中要注意尽量避免实验材料与空气接触,以免被RNA酶降解其中的RNA,要知道RNA酶可是无处不在啊,还有DEPC是有毒的(一般分子实验所用的都多多少少有毒...),所以要小心~