rt+pcr引物设计原则

别竖可5037关于PCR引物与模板互补的问题. -
邰环贪19332889615 ______ 这个问题涉及两个方面:一、DNA的两条链的方向是相反的,一条是5'-3',互补链是3'-5';二、引物退火后,新合成链的方向是5'-3'.PCR用的酶有一个特性,只有在检测到上一个碱基配对完成后才能向下延伸,设计的引物5'端无论修饰与否,只要3'端的碱基能和DNA单链配对就能顺利进行延伸.PCR的引物不是要求完全互补,只要3'端能配对十几个碱基就能发生反应,而且在第一个循环完成后,由上游引物扩增出来的链会和下游引物结合,把你修饰的位点也进行了扩增. 希望对你有帮助.

别竖可5037PCR反应的引物有何种要求? -
邰环贪19332889615 ______ PCR引物设计的11条要求 1.引物最好在模板cDNA的保守区内设计. DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的.在NCBI上搜索不同物种的同一基因,通过序列分析软件(比如DNAman)比对(Alignment),各基因相同的序列就是...

别竖可5037超长引物PCR -
邰环贪19332889615 ______ 1.PCR反应的成功与否不与oligos的大小直接相关,主要看你的primer与模板特异性结合序列有多少个碱基对.虽然你的引物有97bp长,但和模板结合的位置可能仍旧只是20-30bp左右,计算退火温度时,只拿这20-30bp计算就可以了,你引物剩...

别竖可5037我在扩一基因的全长,设计的一对特异引物退火温度一个47度,一个64度,我该怎么确定退火温度? -
邰环贪19332889615 ______[答案] PCR引物设计的原则是两个引物的Tm不能相差5度以上,所以您的引物 可能需要重新设计.至于设计之后确定最适的退火温度,你可以采用梯度PCR,设置不同的退火温度进行PCR,看哪个温度PCR效果最好.

别竖可5037PCR产物如何长久保存?最长可保存多久? -
邰环贪19332889615 ______ 如果近期要用的话就放4度.近期不用的话最好放-20度.应为反复冻融会使得DNA受损.未纯化的PCR产物-20℃放上一周没有什么问题. 对于PCR产物,一般要求纯化后再保存,洗脱液为TA或者纯水,为了后续实验的方便,是不会再加甘油的,所以,保存时间肯定无法和加了甘油的marker比较;对于比较重要的PCR产物. 扩展资料: 设计PCR 引物时的一般原则 (1)引物长度- 一般15~ 30碱基,过短则特异性低; 过长则会引起引物间的退火而影响有效扩增. (2) 避免内部二级结构,避免序列内有较长的回文结构,使引物自身不能形成发夹结构.

别竖可5037引物的设计原则引物设计原则和具体步骤!原理! -
邰环贪19332889615 ______[答案] 一般使用primer5就挺好,不知道你是扩基因还是启动子,基因是否是已知.PCR引物设计原理:PCR引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段,使其能有效地扩增模板DNA序列.因此,引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与...