sds-page凝胶电泳实验步骤

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sds-page凝胶电泳实验步骤

来源：baiyundou.net 日期：2024-09-27

蛋白磷酸化是细胞内重要的信号转导机制，涉及许多细胞功能，如生长、分裂、死亡和应答等。磷酸化的蛋白在细胞信号转导中起着关键作用。因此，研究蛋白磷酸化对于理解细胞生物学和疾病进展是非常重要的。

图1. 酸化定量蛋白组学分析流程

蛋白磷酸化的测定通常使用以下几种方法：

1、放射性标记法：

通常使用γ-32P ATP作为放射性磷酸供体，经由蛋白激酶催化，使目标蛋白进行磷酸化。然后，通过放射性测定来检测蛋白磷酸化的水平。

2、Western blotting：

利用对特定磷酸化位点有特异性的抗体进行检测。首先，蛋白样品经过SDS-PAGE电泳分离，然后转移到PVDF或nitrocellulose膜上，之后用特异的磷酸化抗体进行检测。

图2. Far-Western Blot分析

3、质谱法：

通过蛋白或多肽的质谱分析，可以精确地确定蛋白磷酸化的位点和程度。常用的技术包括液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）。

4、Phos-tag凝胶电泳：

Phos-tag是一种能与磷酸化部位结合的化合物。在Phos-tag SDS-PAGE中，磷酸化的蛋白会在凝胶中移动变慢，从而与非磷酸化的蛋白分离。

5、ELISA（酶联免疫吸附测定法）：

利用磷酸化特异性抗体，可以构建ELISA实验来测定样品中磷酸化蛋白的水平。

6、流式细胞仪：

利用磷特异性抗体和荧光标记，可以通过流式细胞仪来分析单细胞水平上的蛋白磷酸化情况。

选择蛋白磷酸化测定的方法时，需要考虑样品的性质、所需的敏感度和分辨率、可用的仪器设备以及实验的预期目标。

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季应婕1300SDS - PAGE电泳跑的图都花了,条带也歪了,MARKER也歪了.大概是什么原因啊? -
蔡疮才15124574106 ______ SDS-PAGE(十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳)是一种常用于蛋白质分析的电泳技术.在电泳过程中,出现条带歪曲、MARKER歪曲的情况可能有以下几种原因:1. 电泳条件问题:电泳的电压、电流、温度等条件可能会影响条带的迁移和...

季应婕1300做好SDS - PAGE电泳检测的关键是什么? -
蔡疮才15124574106 ______[答案] 丙烯酰胺的有效期,配胶时要混匀充分才灌胶,灌胶时候时间要够快沿边加入,液封时要轻,凝胶凝固的时间够长(分离胶凝40分钟以上,浓缩胶凝半小时以上),在凝胶的期间不要移动凝胶,上样不要溢出,电泳电压不要过高

季应婕1300常规PAGE和SDS PAGE电泳有何异同? -
蔡疮才15124574106 ______ 利用的原理都是胶体的电泳,自由平面(介质)都相同,SDS是在原有的PAGE基础上进行了改进,就是加了SDS使样品(蛋白)的荷质比相同,形状都变成长圆柱体,则样品的迁移率就只与分子量有关,可以较准确的分离开质量不同的成份,目的比一般的电泳更明确

季应婕1300请问能否用最通俗的话去解释SDS凝胶电泳的原理? -
蔡疮才15124574106 ______ 最大的不同是聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)用的蛋白质不做任何变性处理 SDS-PAGE中的SDS是十二烷基磺酸钠,是蛋白质变性剂,SDS能拆散蛋白质的折叠结构,然后沿伸展的多肽链的表面吸附.使肽链带净负电荷,蛋白质在电场中的泳动速度仅与蛋白质颗粒大小有关.

季应婕1300求教SDS - PAGE凝胶电泳与凝胶过滤之间最重要的区别是什么该怎样理解并记忆他们,该掌握哪些方面的内容, -
蔡疮才15124574106 ______[答案] SDS-PAGE凝胶电泳是蛋白质因SDS而带上负电,在电场中的移动凝胶过滤是因为蛋白质的块头不一样大,块头大的进不了凝胶小珠子而先从柱子内流出,块头小的后流出.

季应婕1300在SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳中,sds,sds - page,AB,AP,TEMED分别起什么作用?最好详细一点能不能再说的详细一点 -
蔡疮才15124574106 ______[答案] sds:变性剂,用来变性蛋白和破坏蛋白二级结构. AB:凝胶前体 AP和TEMED用来聚合凝胶. SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的英文缩写是sds-page

季应婕1300SDS电泳为什么被叫做SDS - PAGE? -
蔡疮才15124574106 ______ SDS-PAGE是对钠十二烷基的硫酸盐(SDS)聚丙烯酰胺凝胶电泳法的缩写十二烷基硫酸钠(SDS):阳离子去污剂,作用有四:去蛋白质电荷、解离蛋白质之间的氢键、取消蛋白分子内的疏水作用、去多肽折叠. 聚丙烯酰胺的作用:丙烯酰胺与为蛋白质电泳提供载体,其凝固的好坏直接关系到电泳成功与否,与促凝剂及环境密切相关;

季应婕1300sds - page电泳产生的气体是什么 -
蔡疮才15124574106 ______ 电泳缓冲液里的水被电极分解后产生的氢气和氧气.

季应婕1300SDS - 聚丙烯酰胺凝胶电泳实验 -
蔡疮才15124574106 ______ 你的样品是不是浓度太高了,所以蛋白质都聚集沉淀了?你也可以先检查一下电路是否有问题,不排除是电泳电源不好使;另外你的电流有点高,可能是电流大导致过热,凝胶变性

季应婕1300关于SDS - PAGE电泳 -
蔡疮才15124574106 ______ 1.一般来说,加样孔还是足够深的应该有(1cm),如果觉得比较浅可以多加一点浓缩胶,用来压制胶水平的水或乙醇一点点就可以了. 2.如果只是两边的孔走样,中间的没问题的话,两边的孔加样后条带不直,很可能是电泳槽下面的气泡没有排尽,或者根本就没有注意下面有气泡,另外在电泳过程中因为会产生热,也会产生气泡,如果有可以用滴管吹打排出.气泡不导电,当然会破坏均匀的直流电场,条带就不直了. 另外,为了防止产热,可以将电泳槽放在冰水中散热.电泳过程影响因素较多,为了安全起见,尽量不要用两边的孔.

（编辑：自媒体）