sgrna引物退火

许浅泻4747退火温度低会对PCR产生什么影响? -
田邰婕18562418495 ______ 通常来说,退火温度是由引物的GC%含量决定的,但是反应体系的条件改变也会影响引物的退火温度(如Mg,Na等离子浓度).建议你去http://www.idtdna.com/analyzer/Applications/OligoAnalyzer/分析一下你的PCR体系中的引物退火温度,而不...

许浅泻4747rt - pcr的值为 什么意思 -
田邰婕18562418495 ______ 阈值指指数增长期荧光信号的临界值,一般PCR仪会自动给出阈值,而CT指就是扩增曲线达到阈值时的循环圈数.

许浅泻4747PCR的退火温度对反应的影响 -
田邰婕18562418495 ______ 一般来说,退火温度过低,影响扩增特异性;退火温度过高,则引物与模板不易结合.

许浅泻4747PCR技术与转录的三个区别 -
田邰婕18562418495 ______ 1、PCR在体外进行,转录在体内进行.2、PCR时经历3个阶段:94度变性,30-55度退火,72度延伸.转录的话一直是在体温条件下进行的.PCR所用的是耐高温的DNA聚合酶,而体内转录用的是普通的DNA...

许浅泻4747PCR过程中引物的碱基数量与种类 和 退火温度有什么关系? -
田邰婕18562418495 ______ 引物的另一个重要参数是熔解温度(Tm).这是当50%的引物和互补序列表现为双链DNA分子时的温度.Tm对于设定 PCR退火温度是必需的.在理想状态下,退火温度足够低,以保证引物同目的序列有效退火, 同时还要足够高,以减少非特异...

许浅泻4747RNA是如何反转录成cDNA的?过程和原理怎样?请教 -
田邰婕18562418495 ______ 操作步骤是先加RNA、OligodT、随即引物、水 65C反应10min,冰上放置5min后:这一步是让RNA变性,把RNA的二级结构打开; 再加dNTP,RNaseA,BUFFER, MTV逆转录酶, 反应25℃10min:这一步是让反转录引物(oligodT,随机引物)和模板RNA退火结合 37℃60min:这一步是反转录酶的工作温度 70℃10min:这一步是变性,把合成的cDNA和RNA变性开,就拿到单链的cDNA

许浅泻4747如何提高sgRNA的打靶效率 -
田邰婕18562418495 ______ 为进一步提高CRISPR/Cas9系统的打靶效率,比较共质粒或双质粒表达Cas9内切酶和小向导RNA (sgRNA)的不同载体设计对其打靶效率的影响.方法:将针对AAVS1位点的2个sgRNA序列分别插入表达Cas9的质粒pSpCas9上,再将其构建为Cas9-sgRNA二合一的共质粒以及独立表达sgRNA和Cas9的双质粒系统;质粒转染293T细胞后,用T7E1酶切方法检测打靶效率.结果:不经过变性退火的PCR片段也能直接进行T7E1酶切;Cas9-sgRNA共质粒系统的打靶效率显著高于双质粒系统.

许浅泻4747PCR扩增退火温度确定 -
田邰婕18562418495 ______ 计算退火温度的方法: 1. 退火温度=4*(G+C)+2*(A+T)-(5~8) 只是粗算,有时不灵,但比较简便. 2.用primer5(or oligo6)计算,引物配对好后,primer5可以显示Tm,我认为这个值就是退火温度,我的经验再加2 or 3度最好. 3.合成引物的单子上也有个Tm,减去5~8也可,但有些公司提供的Tm就是方法1计算的.

许浅泻4747我在扩一基因的全长,设计的一对特异引物退火温度一个47度,一个64度,我该怎么确定退火温度? -
田邰婕18562418495 ______[答案] PCR引物设计的原则是两个引物的Tm不能相差5度以上,所以您的引物 可能需要重新设计.至于设计之后确定最适的退火温度,你可以采用梯度PCR,设置不同的退火温度进行PCR,看哪个温度PCR效果最好.

许浅泻4747什么是PCR? -
田邰婕18562418495 ______ 可看作生物体外的特殊DNA复制,是一种分子生物学技术,用于放大特定的DNA片段,简称PCR聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)