t4连接酶takara
房云阅4792ta克隆的优缺点 -
鲍哲奇19685679013 ______ 一、缺点: 1、PCR产物的酶切和判断比较困难. 2、另外酶切连接过程本身也相当地费时费力. 二、优点: 1、克隆PCR产物较简便、快捷的方法. 2、不需使用含限制酶序列的引物,不需将 PCR 产物进行优化,不需把PCR产物做平端处理...
房云阅4792dna连接酶与dna聚合酶是一回事吗?为什么 -
鲍哲奇19685679013 ______ 不一样,DNA聚合酶催化DNA复制中链的延长,即以亲代DNA链为模板,将游离核苷酸聚合成子代新链.DNA连接酶是复制中将后随链冈崎片段连接的酶 两个酶催化生成的都是核苷酸之间的3',5'-磷酸二酯键,但是也有区别:酶\x09 提供3'-OH\x09 提供5'-P\x09 结果 DNA聚合酶 引物或延长中的新链 游离dNTP去PPi (dNMP)n+1 连接酶 复制中不连续的两条单链\x09 不连续转为连续
房云阅4792T4DNA连接酶的主要种类 -
鲍哲奇19685679013 ______ 常用的DNA连接酶有两种:来自大肠杆菌的DNA连接酶和来自噬菌体的T4DNA连接酶.二者的作用机理类似.T4连接酶作用分三步: (1) T4DNA连接酶与辅助因子ATP形成酶-AMP复合物. (2) 酶-AMP复合物结合到具有5'-磷酸基和3'-羟基切口的DNA上,使DNA腺苷化. (3) 产生一个新的磷酸二酯键,把切口封起来.
房云阅4792DNA连接酶能连接单链DNA吗? -
鲍哲奇19685679013 ______ 常见的DNA 连接酶只能连接和同一条链互补在一起的2个片段,或者T4可以连接平末端(也是双链),但是如果要连接单链DNA的话,可以考虑用T4 RNA ligase,可以催化单链连接,不过催化DNA的效率比RNA低一些
房云阅4792最近做酶切连接,为防自连碱性磷酸酶将5'端去磷酸化,可是T4连接酶怎么连接去磷酸化的5'端和3' - OH端啊因为T4连接酶就是催化5'P和3' - OH没有了... -
鲍哲奇19685679013 ______[答案] 据NEB M0202 T4 DNA 连接酶的产品说明: 该酶催化契合的双链DNA或RNA的5'-磷酸末端和3'-羟基末端形成磷酸二酯键.该酶不仅能够催化平滑末端或粘性末端DNA之间的连接,还可以修复双链DNA、RNA或DNA/RNA杂交双链中的单链切口. 也...
房云阅4792T4连接酶可以连接平末端,一样可以连接粘性末端,好像比DNA连接酶厉害的感觉,为什么通常都用DNA连接酶? -
鲍哲奇19685679013 ______[答案] 现在常用的DNA连接酶有T4 DNA连接酶和大肠杆菌DNA连接酶,T4 DNA连接酶可以连接平末端,也可以连接粘性末端,大肠杆菌DNA连接酶只能连接黏性末端.不知道你说的这个“DNA连接酶”是哪种? 一般在实验中常用的连接酶是T4 DNA连接酶.
房云阅4792我问下takara 的puc18载体的目的片段到底是连载什么位置?说明书上也没有, -
鲍哲奇19685679013 ______ 目的片段都是连在多克隆位点之间的,载体和外源都用相同的限制性内切酶酶切,就可以将外源通过连接酶连接上载体.酶切验证时看你设计引物扩增外源片段的酶切位点是什么,就用什么酶切,不过如果外源及载体内部都没有(除MCS)的酶而且在载体酶切酶位点外侧的酶切位点也是可以用来验证的.
房云阅4792T4DNA连接酶在T4噬菌体中的作用 -
鲍哲奇19685679013 ______ 额,同学,是这样的 T4噬菌体它在入侵细菌(等其他细胞)的过程中,噬菌体自身的遗传物质(DNA)会被其他(特别是部分原核生物)的限制性核酸内切酶切掉而发生(DNA)变性 而T4连接酶就是为了修复DNA用的 把DNA再连接起来 恢复活性 总的来说,T4连接酶就是修复被宿主细胞的限制性核酸内切酶切断的DNA的 若我讲得不明白可以再问的..表达能力不好.. 还有不是只有遗传物质进入宿主的,确切说是除了蛋白质外壳之外的东西(所有内部物质)都会进入宿主细胞内.(注意!只有外壳会留在外面)里面的包括(遗传物质和酶)都会进入细胞 ,,,,酶对遗传物质具有保护作用
房云阅4792DNA连接酶和DNA聚合酶的异同点同上 -
鲍哲奇19685679013 ______[答案] 基因工程中所用的连接酶有两种:一种是从大肠杆菌中分离得到的,称之为E·coli连接酶.另一种是从T4噬菌体中分离得到,称为T4连接酶.这两种连接酶催化反应基本相同,都是连接双链DNA的缺口(nick),而不能连接单链DNA.DNA连接酶和...
房云阅4792T4 DNA连接酶催化的连接反应的能量来源是? -
鲍哲奇19685679013 ______[答案] T4 DNA连接酶由一条多肽链组成,分子量为6800,通常催化粘性末端间的连接效率要比催化平末端连接效率为高.催化反应需要Mg2+和ATP,ATP作为反应的能量来源.