trizol提取rna步骤

TRIZOL是一种新型总RNA抽提试剂，可以直接从细胞或组织中提取总RNA。其含有苯酚、异硫氰酸胍等物质，能迅速破碎细胞并抑制细胞释放出的核酸酶。TRIZOL的主要成分是苯酚。TRIZOL在破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性，因此对纯化RNA及标准化RNA的生产十分有用。

TRIZOL是由Invitrogen（现在属于Thermo Fisher Scientific）公司开发的试剂。该公司于1992年推出了TRIZOL试剂，用于细胞和组织中核酸的提取。TRIZOL基于一种名为"acid guanidinium-phenol-chloroform"（酸性胍-酚-氯仿）的三重相分离方法。TRIZOL的开发源于20世纪70年代末和80年代初的研究工作。在当时，科学家们对于高质量的RNA提取方法感兴趣，因为高质量的RNA对于各种分子生物学研究非常重要。然而，传统的RNA提取方法受到DNA和RNA降解、样品丢失等问题的影响，提取效果不佳。为了克服这些问题，一个名为Chomczynski和Sacchi的科学家团队提出了酸性胍-酚-氯仿三重相分离方法。该方法基于胍的碱性特性，通过胍与DNA或RNA结合以避免降解。酚用于裂解细胞，并与酸性胍和核酸形成络合物，从而将核酸保护在有机相中。氯仿用于分离蛋白质和界面相中的DNA/RNA复合物。Invitrogen公司在Chomczynski和Sacchi的方法的基础上开发了TRIZOL试剂，并于1992年推出。TRIZOL在分子生物学研究中得到广泛应用，成为提取总RNA、DNA和蛋白质的常用试剂之一。

TRIZOL的主要成分是苯酚。苯酚的主要作用是裂解细胞，使细胞中的蛋白，核酸物质解聚得到释放。苯酚虽可有效地变性蛋白质，但不能完全抑制RNA酶活性，因此TRIZOL中还加入了8－羟基喹啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNase（RNA酶）。TRIZOL是从细胞和组织中提取总RNA的即用型试剂，在样品裂解或匀浆过程中，TRIZOL能保持RNA完整性。加入氯仿后，溶液分为水相和有机相，RNA在水相中。取出水相，用异丙醇可沉淀回收RNA。TRIZOL试剂是一种单步法的试剂，能够在一个试管中完成细胞裂解和核酸、蛋白质的提取。其作用原理可以分为以下步骤：

1.细胞裂解：TRIZOL试剂中含有酚，可以迅速破坏细胞膜，使RNA、DNA和蛋白质释放出来。

2.聚集：TRIZOL试剂中含有胍类化合物（如盐酸胍），可以使RNA和DNA在酚的存在下与胍形成络盐，从而使RNA和DNA聚集在有机相中，保护核酸不被降解。

3.盐析：TRIZOL试剂中的氯仿用于与有机相中的RNA/DNA络盐形成亲水相，从而将RNA/DNA精准分离出来。同时，蛋白质也会被分离到氯仿相中。

4.进一步纯化：得到的RNA/DNA可以通过洗涤、乙醇沉淀等方法进一步纯化，以获得高质量的核酸样品。

总体来看，TRIZOL试剂通过胍和氯仿的配合使用，可完成细胞/组织的裂解、RNA/DNA的提取和蛋白质的分离，具有操作简便、提取效率高、成本较低等特点，因而成为常用的核酸提取试剂之一。

检测小贴士！

在平时处理需要提取RNA的送测样品时，如果样本量过于少（比如细胞或者少量的菌体沉淀等样品），可以在去掉培养液后加入适量的TRIZOL后再进行样品寄送，可以减少样本降解的风险。血液样本除了可以加抗凝剂或用抗凝管寄送外，也可以按3mL血液样本加入9mL TRIZOL试剂的比例（1:3）混匀后寄送。

尤冉文5125Trizol法提取流感病毒 RNA -
寿选柏15773897580 ______ 1、取200ul样品数+阴性对照+阳性对照加入1.5ml灭菌eppendorf管; 2、加600ul异硫氰酸胍,然后加入对照和样品,再加200ul氯仿,颠倒混匀; 3、13000rpm离心15min; 4、在第3步离心快结束时,另取同样多eppendorf管,加入400ul于-20℃...

尤冉文5125trizol法提取血中的RNA,怎样做量会更多 -
寿选柏15773897580 ______ 或再适当延长一点时间.迅速离心,少加些血.混匀之后放置10分钟左右,混匀再去离心. 可以不用先离心去沉淀之后再加三氯甲烷1 血要新鲜,之后加75%乙醇.只洗一遍. 3 每个步骤操作要快,用的时间药短些,防止降解 4 异丙醇沉淀的时候,放-20°C的冰箱半个小时.一般我都加的30.如果需要浓度高点可以少加水. 6 提取RNA之后迅速反转录成cDNA再保存,洗2遍易损失部分RNA.如果是冻存的,在解冻时要完全,之后再加Trizol. 2 可以稍多加一些Trizol,直接加三氯甲烷.干燥一会就迅速加DEPC水少量. 5 不要过分干燥,管内稍有点残余的乙醇也没关系

尤冉文5125为什么trizol提不出来rna -
寿选柏15773897580 ______ trizol提不出来rna的原因有可能是以下原因: 1)你的Trizol试剂核有无问题? 2)研究材料是否新鲜,RNA容易降解,应妇80度保存. 3)如果都没问题,你的操作有无问题? trizol提取rna的步骤:(仅供参考) 用户需自备的试剂和材料 无水乙...

尤冉文5125trizol法提取RNA分成的三相分别是什么 -
寿选柏15773897580 ______[答案] 上层无色,接近透明色的为RNA;中层白色(很薄)的为DNA;下层红色的为蛋白质.基本的层次和颜色是这样的,但是植物材料考虑到色素的问题,颜色会有细微的差异.三相中DNA最薄,另外两相差不多,RNA相比蛋白质厚一点.

尤冉文5125trizol法提取RNA时在哪一步加入DNase来去除gDNA? -
寿选柏15773897580 ______[答案] 如果操作得当,一般RNA产物很少有DNA污染的.如果OD比值显示有污染,可以尝试在重悬RNA团块时用含DNase I的buffer切一会儿试试,最后重新用酚氯仿异戊醇抽提一次,最后用无水乙醇沉淀再离心重悬,但是不建议重新抽提,最好从优化正常...

尤冉文5125细胞总RNA怎样提取?
寿选柏15773897580 ______ 操作步骤: 将Trizol、氯仿、冷PBS、EP管、灭酶枪头、一次性手套、EP管架、吸管等物品带入细胞室. 1、 取出EP管、做好标记 2、 取出细胞、收集上清保存备用 3、 用冷PBS冲洗细胞两次 4、 加入1ml Trizol (24孔板每孔加0.5ml即可),调小刻度用移液器吹打细胞至液体澄清(生化:摇动混匀后室温孵育10min) 详细的操作步骤,生物帮上面有的, http://www.bio1000.com/zt/cell/46213.html 细胞因子,干扰素的作用,白介素价格,肿瘤坏死因子功能

尤冉文5125如何提取芦荟RNA 最好是苯酚法 -
寿选柏15773897580 ______ 动植物组织mRNA提取: 一、材料 水稻叶片或小鼠肝组织. 二、设备 研钵,冷冻台式高速离心机,低温冰箱,冷冻真空干燥器,紫外检测仪,电泳仪,电泳槽. 三、试剂 1、无RNA酶灭菌水:用将高温烘烤的玻璃瓶(180℃ 2小时)装蒸馏水...

尤冉文5125trizol提取RNA时,最后的RNA为什么不能完全干燥,其干燥后不易溶解的原理是什么? -
寿选柏15773897580 ______[答案] 最后的到RNA的上一步是酒精洗涤,提取的RNA当然不是完全干燥,提取后可以用小号枪头洗出较多的液体,剩下就在空气中自然干燥;但是太干就不容易溶解,因为太干的话RNA之间就结合的非常紧密.

尤冉文5125怎么提取RNA? -
寿选柏15773897580 ______ 我们实验室用的是TRIZOL试剂盒,原理就是先组织匀浆,然后将RNA与蛋白质等分离,这个用的是戊二醇,然后再用柱子加各种溶剂,各种12000r/min离心,多次离心之后,经过洗涤干燥,再溶于DEPC水就可以冷藏了. 整个实验中要注意尽量避免实验材料与空气接触,以免被RNA酶降解其中的RNA,要知道RNA酶可是无处不在啊,还有DEPC是有毒的(一般分子实验所用的都多多少少有毒...),所以要小心~

尤冉文5125DNA和RNA提取原理是什么?还有相关试剂盒的原理,各步的作用~ -
寿选柏15773897580 ______[答案] TRIzol试剂有多组分分离作用,与其他方法如硫氰酸胍/酚法、酚/SDS法、盐酸胍法、硫氰酸胍法等相比,最大特点是可同时分离一个样品的RNA\DNA\蛋白质.TRIzol使样品匀浆化,细胞裂解,溶解细胞内含物,同时因含有RNase抑制剂可保持RNA的...